Padronização da reação de imunofluorescência direta para detecção de oocistos de cryptosporidium parvum em amostras fecais de bezerros

• Ano de defesa: 2010
• Autor(a) principal: Teixeira, Weslen Fabricio Pires [UNESP]
• Orientador(a): Meireles, Marcelo Vasconcelos [UNESP], Nunes, Caris Maroni [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Criptosporidiose; Diagnostico; Zoonoses; Anticorpos policlonais; Bovinos; ELISA
• Palavras-chave em Inglês: Polyclonal antibodies; Bovine; Cryptosporidiosis; Diagnosis
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/94698

O objetivo deste estudo foi padronizar a reação de Imunofluorescência direta (IFD) para detecção de oocistos de Cryptosporidium parvum em amostras fecais de bezerros. Os anticorpos policlonais anti-C. parvum foram produzidos em dois coelhos adultos da raça Nova Zelândia, e titulados por meio do ensaio imuno-enzimático indireto (ELISA). A fração de imunoglobulina G (IgG) foi purificada a partir do soro do coelho imunizado, utilizando-se diálise em sulfato de amônio seguida de cromatografia em coluna de DEAE celulose e conjugação com isotiocianato de fluoresceína. Por meio da IFD padronizada, foi testada a reatividade cruzada do conjugado produzido contra outras espécies de Cryptosporidium (C. andersoni e C. serpentis) e com outros agentes etiológicos presentes em fezes de bovinos (Escherichia coli, Eimeria sp. e Candida sp.). A IFD foi comparada à microscopia com contraste de fase em solução de Sheather (MCF), avaliando a capacidade de detecção de oocistos de Cryptosporidium sp. em alíquotas de fezes de bezerro inoculadas com oocistos de C. parvum, e em amostras fecais de bezerros naturalmente infectados provenientes de 37 propriedades leiteiras da região de Araçatuba, SP. Nas amostras comprovadas como positivas, foi ainda feita uma análise semi-quantitativa de oocistos de Cryptosporidium sp., visualizados por campo de microscopia em ambas as técnicas. O conjugado anti-C. parvum apresentou reatividade com C. andersoni e C. serpentis. A IFD foi utilizada com sucesso para detecção de oocistos de C. parvum em fezes de bezerros, apresentando sensibilidade para detecção de até 104 oocistos em 3 g de fezes. Entre as 300 amostras fecais de bezerros naturalmente infectados, 19,67% (59/300) foram positivas para a presença de oocistos de Cryptosporidium sp. pela IFD, apresentando diferença estatisticamente significante (p<0.05) em relação às amostras positivas pela MCF