Resistência a cobre em Xanthomonas axonopodis pv. citri. Estudos de caracterização molecular e bioquímica de genes e proteínas

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2006
Autor(a) principal: Teixeira, Elaine Cristina [UNESP]
Orientador(a): Bertolini, Maria Celia [UNESP]
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Cancro citrico
Xanthomonas axonopodis pv. citri
Bacterias fitopatogenicas
Biotecnologia
Palavras-chave em Inglês:
Citrus canker
Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/100754
Resumo: O presente trabalho teve como principal objetivo realizar estudos funcionais na bactéria Xac, estudando o possível envolvimento dos genes copA, copB e cutC no mecanismo de resistência a cobre nesta bactéria. Estes estudos funcionais envolveram: análise da expressão dos genes durante o crescimento na presença de cobre por Northern e Western blots e por eletroforese bi-dimensional, produção e purificação das proteínas recombinantes e produção de anticorpos, inativação de um dos genes (copA) para avaliar a participação da proteína CopA no mecanismo de resistência a cobre e análise da interação das proteínas de resistência a cobre com outras proteínas de Xac através do ensaio de duplo híbrido de leveduras. Os resultados obtidos mostraram que a linhagem mutante infecta a planta, mas os sintomas são mais retardados na presença do metal, quando comparada à linhagem selvagem. O crescimento das células mutantes na ausência e presença de cobre in planta indicou maior sensibilidade ao cobre pelas células mutantes. Na tentativa de verificar se as proteínas CopA, CopB e CutC interagem com outras proteínas de Xac, um ensaio de duplo híbrido de leveduras foi realizado. Através deste ensaio, algumas proteínas foram identificadas, as quais necessitam de estudos de caracterização adicionais.
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Estes estudos funcionais envolveram: análise da expressão dos genes durante o crescimento na presença de cobre por Northern e Western blots e por eletroforese bi-dimensional, produção e purificação das proteínas recombinantes e produção de anticorpos, inativação de um dos genes (copA) para avaliar a participação da proteína CopA no mecanismo de resistência a cobre e análise da interação das proteínas de resistência a cobre com outras proteínas de Xac através do ensaio de duplo híbrido de leveduras. Os resultados obtidos mostraram que a linhagem mutante infecta a planta, mas os sintomas são mais retardados na presença do metal, quando comparada à linhagem selvagem. O crescimento das células mutantes na ausência e presença de cobre in planta indicou maior sensibilidade ao cobre pelas células mutantes. Na tentativa de verificar se as proteínas CopA, CopB e CutC interagem com outras proteínas de Xac, um ensaio de duplo híbrido de leveduras foi realizado. Através deste ensaio, algumas proteínas foram identificadas, as quais necessitam de estudos de caracterização adicionais.Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) is the causal agent of the citrus canker, a serious disease that affects the most commercial citrus cultivars causing serious economic impacts. Symptoms include canker lesions, leading to abscission of fruit and leaves and general tree decline. By sequencing the genome of this bacterium (ONSA Network, FAPESP, Brazil), a better knowledge of this microorganism and its molecular interactions with the host might be elucidated. For this, we analyzed the gene expression during growth in the presence of copper by Northern and Western blots, 2D-electrophoresis, production and purification of the CopA, CopB, and CutC recombinant proteins, inactivation of the copA gene to evaluate the participation of CopA protein in the copper resistance mechanism, and protein-protein interactions assays by the yeast two-hybrid assay. Results showed that the mutant strain infects the plant, but the lesions formation was retarded in the presence of copper. The mutant strain showed more sensitivity to copper than the wild type strain during growth in planta. In order to verify whether the CopA, CopB, and CutC proteins interact with other proteins of Xac, a yeast two-hybrid assay was performed. By this assay, some proteins were identified, which need further characterizations.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)167 f. : il.porUniversidade Estadual Paulista (Unesp)Alephreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPCancro citricoXanthomonas axonopodis pv. citriBacterias fitopatogenicasBiotecnologiaCitrus cankerResistência a cobre em Xanthomonas axonopodis pv. citri. Estudos de caracterização molecular e bioquímica de genes e proteínasinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessBiotecnologia - IQBiotecnologiaUniversidade Estadual Paulista (UNESP), Instituto de Química, Araraquara8817669953838863Publicationbc74a1ce-4c4c-4dad-8378-83962d76c4fdvirtual::45819-1bc74a1ce-4c4c-4dad-8378-83962d76c4fdvirtual::45819-1ORIGINALteixeira_ec_dr_araiq.pdfapplication/pdf2441746https://repositorio.unesp.br/bitstreams/5a549d81-817f-428e-9d7d-4b2b7b2cf256/download6a8b98becf92d1426314457c9b30825cMD51trueAnonymousREADTEXTteixeira_ec_dr_araiq.pdf.txtWritten by FormatFilter org.dspace.app.mediafilter.TikaTextExtractionFilter on 2024-01-13T06:38:05Z (GMT).Extracted texttext/plain102784https://repositorio.unesp.br/bitstreams/8a9175dc-9c0a-43d1-9412-76db5d9e9666/downloadece3dfd4336efb29978cf22c26511737MD54falseAnonymousREADTHUMBNAILteixeira_ec_dr_araiq.pdf.jpgWritten by FormatFilter org.dspace.app.mediafilter.ImageMagickPdfThumbnailFilter on 2016-11-11T07:53:36Z (GMT).IM Thumbnailimage/jpeg4278https://repositorio.unesp.br/bitstreams/16d262b2-565f-4108-993c-cc2fc55f5c9b/download3b4716740f8b0636405c846baf548617MD53falseAnonymousREAD11449/1007542026-03-11T17:10:04.724966Zopen.accessoai:repositorio.unesp.br:11449/100754https://repositorio.unesp.brRepositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestrepositoriounesp@unesp.bropendoar:29462026-03-11T17:10:04Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false
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