Modulação gênica de neutrófilos humanos após infecção in vitro com Leishmania infantum

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Scaramele, Natalia Francisco [UNESP]
• Orientador(a): Lopes, Flavia Lombardi
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Leishmaniose; RNA Mensageiro; MicroRNAs; RNA Longo não Codificante; Neutrófilos; Imunidade Inata
• Palavras-chave em Inglês: Leishmaniasis; RNA, Messenger; RNA, Long Noncoding; Neutrophils; Immunity, Innate
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/244453

A leishmaniose é uma zoonose tropical negligenciada com altas taxas de morbidade e mortalidade. É causada por protozoários do gênero Leishmania e transmitida durante o repasto sanguíneo das fêmeas de Lutzomyia longipalpis. Uma das manifestações clínicas da doença é a leishmaniose visceral, causada principalmente pela espécie L. infantum (syn. chagasi) nas Américas. Os sintomas da leishmaniose visceral incluem febre, anorexia, perda de peso, distensão abdominal, fraqueza e um aumento abdominal significativo, decorrente de hepato e esplenomegalia. Apesar da disponibilidade de medicamentos para tratar a doença, nenhuma vacina está comercialmente disponível para humanos. O papel dos neutrófilos como parte da resposta inata à Leishmania spp. infecção é duvidosa e varia de acordo com a espécie causadora da infecção. Ainda, a expressão global de RNAs codificantes, microRNAs e RNAs longos não codificantes muda como parte da resposta imune contra patógenos. No presente trabalho buscamos entender os padrões de expressão gênica de transcritos (codificantes e não codificantes) em neutrófilos humanos infectados in vitro com L. infantum. Isolamos neutrófilos de sangue total de doadores saudáveis do sexo masculino (n=5) e dividimos em grupos: 1) infectados com L. infantum (MOI = 5:1) e 2) controles não infectados. No grupo infectado as promastigotas não internalizadas após 3 horas foram removidas e, ao tempo de 20 horas pós-infecção o RNA total foi extraído das células dos grupos controle e infectado. Posteriormente foram realizadas duas técnicas: 1) sequenciamento de RNA total, e 2) microarranjo de microRNA. Observamos mudanças na expressão de 212 transcritos (log2(FC)±0,58, FDR≤0,05), sendo classificados: 202 RNAs mensageiros, seis RNAs longos não-codificantes, um RNA “miscellaneous”, um RNA nuclear pequeno, um pseudogene não processado e um pseudogene processado. E na expressão de 289 microRNAs (FC±2, FDR≤0,01). Com o auxílio de ferramentas bioinformáticas, pudemos ainda predizer funções biológicas aos nossos achados, e com isso inferimos que as mudanças observadas tanto na expressão de RNAs codificadores como dos não codificadores de neutrófilos estão associadas ao prejuízo na fagocitose, produção de óxido nítrico e de citocinas pró-inflamatórias após a infecção com L. infantum, favorecendo a persistência do parasito. Nosso trabalho lança luz sobre vários mecanismos utilizados pela L. infantum para controlar a resposta imune mediada por neutrófilos e identifica vários alvos para futuros estudos funcionais, visando o desenvolvimento de tratamentos preventivos ou curativos para esta prevalente zoonose.