Cruzipaína (Czp1) como bioindicador no diagnóstico de Trypanosoma cruzi (Chagas, 1909) (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) em suco de açaí (Euterpe oleraceae) por ensaio Imunoenzimático

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Garcia, Alef Henrique [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; Técnicas Imunoenzimáticas; Cisteína Proteases; Euterpe
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/243693

A doença de Chagas é uma enfermidade infecciosa que afeta principalmente populações carentes em países menos desenvolvidos. É endêmica em 21 países das Américas, atingindo cerca de 6 a 7 milhões de pessoas e causando uma média de 14.000 mortes anualmente. O agente causador é o protozoário flagelado Trypanosoma cruzi, que é veiculado por triatomíneos, insetos hematófagos conhecidos como "barbeiros". Este estudo teve como objetivo avaliar as proteínas secretadas pela cepa Y (TcII) de T. cruzi em sua forma tripomastigota em solução salina tamponada com fosfato (PBS). Para tanto, técnicas de biologia molecular e bioquímica foram utilizadas para identificar a cisteína protease cruzipaína por anticorpos e analisar a quantidade secretada em suco de açaí por meio de Western blot. A solução de formas tripomastigotas em PBS foi utilizada como padrão para verificar se a quantidade secretada de cruzipaína era suficiente para um teste imunoenzimático. Utilizou-se o plasmídeo pET21a contendo o gene da cisteína protease natural cruzipaína Wild Type (W.T), com uma cauda His6-tag, transformado para expressão em E. coli resistente à ampicilina como controle positivo. Para a metaciclogênese induzida in vitro, utilizou-se a cepa Y de T. cruzi e camundongos heterogênicos machos da linhagem Swiss. Os animais com parasitemia alta foram eutanasiados para coleta de sangue, que foi cultivado em meio LIT. A cruzipaína recombinante expressa em Bl21 foi confirmada por Western blot com banda de 37 kDa. Os dados apresentados indicam que o método utilizado para expressar a cruzipaína em Bl21 foi eficiente, produzindo uma quantidade satisfatória de secretomas. As etapas foram consideradas efetivas para alcançar esse resultado. Os métodos são considerados preliminares e requerem validação e testes adicionais para determinar sua eficácia na detecção de cruzipaína em suco de açaí. No entanto, os resultados obtidos são promissores e ajudam a entender as propriedades da cruzipaína recombinante em ensaios imunoenzimáticos e em amostras de suco de açaí. É importante enfatizar que medidas devem ser tomadas para preservar a integridade da proteína durante o processo de quantificação de proteínas. A degradação do anticorpo usado afeta a eficiência do método dot blot.