Avaliação do efeito da terapia fotodinâmica antimicrobiana associada a DNase no tratamento de candidose oral em camundongos infectados com Candida albicans

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Jordão, Cláudia Carolina [UNESP]
• Orientador(a): Pavarina, Ana Cláudia [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Fotoquimioterapia; Desoxirribonucleases; Candida albicans; Resistência a medicamentos; Expressão gênica; Inflamação
• Palavras-chave em Inglês: Photochemotherapy; Deoxyribonucleases; Candida albicans; Drug resistance; Gene expression; Inflammation
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11449/255174

O objetivo do estudo foi avaliar a eficácia da terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) associada a enzima DNase I no tratamento de candidose oral induzida em camundongos infectados com cepas de Candida albicans susceptível (CaS-ATCC 90028) e resistente ao fluconazol (CaR-ATCC 96901). Camundongos fêmeas (Swiss) com aproximadamente 5 semanas de vida foram imunossuprimidos e inoculados com CaS ou CaR (107 UFC/mL). Após o estabelecimento da infecção, os animais foram submetidos aos tratamentos durante 5 dias consecutivos. Os animais pertencentes ao grupo aPDT (P+L+) foram tratados utilizando Photodithazine (PDZ) 200 mg/L associado à luz LED (50 J/cm2); no grupo P+L- foi utilizado apenas o PDZ; no grupo P-L+ os animais foram tratados apenas com LED. Nos animais do grupo DNase a enzima foi aplicada por 5 minutos. Também foi avaliada a combinação das terapias (DNAse+P+L+). Um grupo foi apenas inoculado com C. albicans (grupo P-L-) e outro foi constituído de animais saudáveis, imunossuprimidos ou não (grupo CNI+/CNI). Imediatamente e 7 dias após o término dos tratamentos, foram realizadas as recuperações de C. albicans por meio da fricção de swabs estéreis. Então, diluições seriadas foram realizadas e plaqueadas em placas de Petri com Ágar Sabouraud Dextrose (SDA). Após 48 horas de incubação a 37 oC, as colônias foram quantificadas e o número de CFU/mL foi determinado. Além disso, as colônias foram armazenadas para avaliação da expressão gênica (EFG1, HWP1, BGL2, PHR1 e SOD1). Também foram realizadas análises macroscópicas das lesões durante os tratamentos. Os camundongos foram eutanasiados 24 horas e 7 dias após os tratamentos. As línguas removidas foram utilizadas para análise histológica das lesões, marcações da estrutura 3D do tecido da língua e da matriz extracelular (MEC) de C. albicans e para avaliação das citocinas inflamatórias por meio de citometria de fluxo (IL-6, MCP-1, IFN-γ, TNF-α, proteína IL-12p-70 e IL-10). Os resultados demonstraram que a associação da DNAse com a aPDT resultou em uma redução de 4,96 (imediatamente) e 1,87 log10 (7 dias) para os animais inoculados com CaS e de 2,89 (imediatamente) e 1,97 log10 (7 dias), para os animais inoculados com CaR. A análise macroscópica revelou redução das lesões orais do grupo DNase+P+L+, equivalentes a 98,92 e 96,07% para os animais inoculados com CaS e CaR nos grupos coletados 24h após os tratamentos, respectivamente. Após 7 dias do término dos tratamentos, foram observadas reduções de 83,31 e 75,24% nos aspectos das lesões no grupo DNase+P+L+ dos animais inoculados com CaS e CaR, respectivamente. A análise histológica do grupo DNase+P+L+ demonstrou expressiva redução da reação inflamatória no tecido que apresentou características histológicas de normalidade. Microscopia de fluorescência demonstrou que os polissacarídeos produzidos por C. albicans e as células fúngicas não foram marcados no grupo de animais tratados com DNase seguida de aPDT 24 horas após o término dos tratamentos, aspecto semelhante ao observado para o grupo de animais saudáveis. Após 7 dias do término dos tratamentos, o grupo de animais tratados com a DNase associada à aPDT manteve uma marcação reduzida quando comparados ao controle (animais infectados e não tratados). Os resultados demonstraram redução na expressão de genes relacionados com adesão ao substrato do hospedeiro (EFG1 e HWP1), matriz extracelular (BGL2 e PHR1) e estresse oxidativo (SOD1) de CaS e CaR após os tratamentos com DNase+P+L+. A resposta imune do hospedeiro demonstrou que os grupos de animais inoculados com CaS ou CaR e tratados com P+L+ e DNase+P+L+ apresentaram produção aumentada de IL-6, MCP-1 e TNF-α. Assim, a DNase associada com a aPDT é uma alternativa promissora de tratamento para inativação de fungos, incluindo microrganismos resistentes, e motiva futuras aplicações clínicas do tratamento nas áreas odontológicas e médicas.