Modulação da produção metabólica de Botryosphaeria parva utilizando a abordagem OSMAC, e sua co-cultura com o endófito Pseudofusicoccum stromaticum

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Monfardini, Júlia Dietsche [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: OSMAC; Co-cultura; Botryosphaeria parva; Pseudofusicoccum stromaticum; Syzygium cumini (L.) Skeels
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/193177

Os micro-organismos constituem uma das mais importantes formas de vida que fornecem substâncias que podem ser utilizadas em diversas áreas, como: farmacêutica, bioquímica, alimentícia e agropecuária. A abordagem OSMAC (One Strain Many Compounds), visa, na mudança nos parâmetros de cultivos de micro-organismos, diversificar e aumentar a produção de metabólitos secundários de uma única cepa. O fungo endofítico Botryosphaeria parva, oriundo das folhas de Syzygium cumini (L.) Skeels, foi submetido à abordagem OSMAC variando-se os meios de cultivo: Arroz parboilizado (meio sólido), Extr. de Malte, Nutrient, PDB e YM (meios líquidos), e o fungo endofítico Pseudofusicoccum stromaticum, oriundo dos frutos maduros de S. cumini (L.) Skeels, foi cultivado em meio de Extr. de Malte. Após o período de fermentação de B. parva em meio sólido, iniciou-se uma extração direta com CH3OH, seguida de filtração e evaporação do solvente. O extrato obtido foi solubilizado em AcOEt e realizou-se três partições líq.-líq. com H2O, em que após a evaporação do solvente orgânico, o extrato obtido foi dissolvido em CH3CN e foi realizada uma nova partição líq.-líq. com Hexano, e após evaporação da CH3CN, foi obtido o extrato de interesse. Após o período de fermentação dos endófitos nos meios líquidos, as suspensões micelares foram filtradas a pressão reduzida, separando os micélios dos meios fermentados. Em seguida, os filtrados aquosos foram submetidos a três partições líq.-líq. com AcOEt, e após a evaporação do solvente orgânico, foram obtidos os extratos de B. parva e P. stromaticum, nos meios líquidos. Os extratos de B. parva, em meio de arroz parboilizado e extr. de malte, e o extrato de P. stromaticum foram fracionados utilizando técnicas cromatográficas, como Cromatografia em Coluna e/ou Cromatografia Líquida de Alta Eficiência preparativa, em que após os fracionamentos, foram obtidas 33 substâncias oriundas de B. parva e 11 substâncias de P. stromaticum, caracterizadas por meio de análises espectrométricas (EM, RMN 1D e 2D) e pertencentes à diversas classes químicas, como: terpenos, isocumarinas, dicetopiperazinas, compostos fenólicos, ftaletos, pirazinas, pirrololactonas e pentapeptídeos cíclicos. Dentre as 40 substâncias identificadas, 11 são inéditas: botryosftaleto A (04), botryospirazina A (05), botryosarina A (06), botryosphaerina J (07), botryosarina B (08), botryosphaerina K (09), botryosphaerina L (20), 4-hidroxiterpestacina (21), botryosbenzofuranona A (26), botryosbenzenodiol A (28), botryosbenzenodiol B (32). O estudo da co-cultura dos endófitos foi realizado em meio de ext. de malte e ao final do período de fermentação o caldo fermentado foi submetido a três partições líq.-líq. com AcOEt, e o extrato foi gerado após a evaporação do solvente orgânico. A análise do extrato via CLAE-EM indicou a produção de 13 substâncias que não foram detectadas nas monoculturas, e destas, oito não apresentaram registros em quatro bases de dados (massBank, Metlin, GNPS e Dicionário de Produtos Naturais), sendo consideradas inéditas, mas ainda a serem identificadas. Os estudos relacionados ao B. parva e P. stromaticum têm como finalidade verificar suas produções metabólicas frente a diferentes estímulos, bem como avaliar o potencial biológico dos extratos, nos ensaios antibacteriano, antiglicante, antioxidante, antifúngico, anticolinesterásico e citotóxico, em que os extratos de B. parva apresentaram atividades anticolinesterásica, antifúngica e citotóxica, e o extrato de P. stromaticum apresentou atividades antiglicante antioxidante e citotóxica.