Uso de meio condicionado por células estromais mesenquimais uterinas durante o cultivo in vitro de embriões bovinos

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Cintra, Lais do Nascimento
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: RT-qPCR; suplementação; meio condicionado; célula mesenquimal estromal endometrial; cultivo embrionário; supplementation; endometrial mesenchymal stromal cell; conditioned medium; total cell number; embryo culture
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/158307

As tecnologias de reprodução assistida, tais como a fertilização in vitro (FIV), transferência de embriões, transgenia e clonagem, ainda não tem o impacto comercial desejado devido a baixa produção embrionária. Apenas 30 a 40% dos blastocistos desenvolvidos são obtidos de oócitos após a MIV, fertilização e cultivo dos embriões, embora 80% dos oócitos maturados in vitro sejam fertilizados com sucesso. O soro fetal bovino (SFB) é o suplemento mais utilizado no cultivo de embriões in vitro, uma vez que melhora o desenvolvimento dos blastocistos. Apesar disso, sua presença está relacionada a alterações do metabolismo embrionário, perda de qualidade e indução de modificações na expressão de vários genes embrionários. Na tentativa de minimizar os efeitos deletérios do SFB, várias citocinas e fatores de crescimento têm sido acrescentados aos meios de cultivo embrionários in vitro, com a intenção de mimetizar as condições de cultivo in vivo. O presente experimento tem como objetivo avaliar e comparar os efeitos da adição do SFB e de meio condicionado por células mesenquimais estromais (MSCs) durante o cultivo embrionário. Os parâmetros analisados foram a viabilidade embrionária, apoptose e o perfil transcricional de genes relacionados à qualidade dos embriões. Não foi observado uma diferença (P≥0,05) na clivagem dos blastocistos, porém observou-se que a taxa de produção de embriões utilizando SFB no CIV foi maior (P≤0,05) quando comparada com MC, mas não diferiu (P≥0,05) do grupo produzido com BSA. A expressão relativa de mRNA para ELOVL6 foi maior no grupo MC, para CASP3 no grupo BSA, e para ACSL3 e VEGF no grupo SFB. Em conjunto, esses dados sugerem que o MC pode ser utilizado como uma alternativa ao SFB. Observamos um perfil de expressão gênica diferente, sugerindo que o MC inibiu o aumento da expressão relativa de mRNA para CASP3. Ademais, o MC favoreceu o número total de células, inibiu a porcentagem de células em apoptose e produziu um embrião de melhor qualidade.