Potencial de transdiferenciação in vitro de células tronco mesenquimais equinas em células schwann-like

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Ferreira, Lucas Vinícius de Oliveira [UNESP]
• Orientador(a): Amorim, Rogério Martins [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Células Schwann-like; Fatores neurotróficos; Lesão de nervo periférico; Nervo facial; Regeneração nervosa
• Palavras-chave em Inglês: Schwann-like cells; Neurotrophic factors; Peripheral nerve injury; Facial nerve; Nerve regeneration
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/236747

As lesões do sistema nervo periférico (SNP) são condições clínicas comuns que podem desencadear déficits funcionais, afetando a qualidade de vida de humanos e equinos. As lesões do nervo facial são comumente observadas nestas espécies. Para o processo de regeneração, as células de Schwann (CS) são fundamentais, pois proliferam e produzem fatores neurotróficos. Contudo, a sua utilização como terapia celular é limitada devido à disponibilidade destas células e do tempo de cultivo. Neste contexto, busca-se desenvolver tecnologias ou métodos alternativos para a geração de CS. Diversos estudos demonstram a capacidade das células tronco mesenquimais (CTM) se transdiferenciarem em células de Schwann-like (CSL) utilizando a co-cultura com CS ou protocolos químicos. Entretanto, são métodos de difícil execução e com custos elevados. Uma abordagem mais prática para induzir a transdiferenciação in vitro das CTM foi descrita com sucesso utilizando meio de cultura condicionado com fatores neurotróficos secretados do nervo isquiático de ratos. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial de transdiferenciação in vitro de CTM equinas derivadas do tecido adiposo (TA), medula óssea (MO) e cordão umbilical (CU) em CSL. Neste estudo, o nervo facial de um equino adulto foi coletado após o procedimento de eutanásia. O nervo foi seccionado em fragmentos e incubado em meio de cultura completo por 48 horas. Este meio foi filtrado e utilizado como meio de indução para transdiferenciação das CTM em CSL. As CTM foram previamente caracterizadas imunofenotípicamente pela expressão dos marcadores CD44, CD90, CD105 e ausência da expressão dos marcadores CD34 e MHC-II; e pela capacidade de diferenciação em linhagem mesenquimal osteogênica, condrogênica e adipogênica. As CTM-TA, CTM-MO, CTM-CU equinas foram incubadas com o meio de indução por cinco dias. Após este período foi avaliado a morfologia, a expressão gênica dos marcadores glias S100β e GFAP (proteína ácida fibrilar da glia), do fator de crescimento do nervo (NGF), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), fator neurotrófico derivado da glia (GDNF) e realizado a imunofluorescência de S100 e GFAP. As CTM-TA e CTM-MO incubadas com o meio de indução exibiram morfologia bipolar e/ou tripolar com grandes núcleos, processos citoplasmáticos alongados, semelhantes à morfologia SC. Já nas CTM-CU não foram observadas alterações morfológicas. Houve aumento significativo na expressão gênica de BDNF, GDNF, GFAP e S100β nas CTM-TA, de GDNF, GFAP e S100β nas CTM-MO e de GDNF nas CTM-CU pós-diferenciação. Não verificamos a expressão gênica de GFAP em nenhuma das amostras, mas a expressão de S100β foi observada em todas as amostras após o processo de transdiferenciação das CTM-CU. A imunofluorescência revelou a expressão proteica de GFAP nas CTM-TA, CTM-MO e CTM-CU equinas indiferenciadas e diferenciadas. Entretanto, S100 foi expresso apenas em CTM-TA e CTM-MO equinas diferenciadas. Nossos resultados indicam a transdiferenciação das CTM-TA e CTM-MO equinas em CSL. Portanto, o protocolo de transdiferenciação de CTM-TA e CTM-MO equinas proposto neste estudo mostrou-se eficiente. Contudo, nossos dados não foram consistentes em relação as CTM-CU equinas e não verificamos a capacidade de transdiferenciação dessas células em CSL.