Caracterizaçao de estirpes de Staphylococcus spp isoladas em ambiente de ordenha e no leite bubalino

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Pizauro, Lucas José Luduverio [UNESP]
• Orientador(a): Zafalon, Luiz Francisco [UNESP], Ávila, Fernando Ântônio de [UNESP], Rossi Junior, Oswaldo Durival [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Alinhamento; Buballus bubalis; Genômica; Genes de virulência; MALDI-TOF MS
• Palavras-chave em Inglês: Alignment; Genomic; Virulence genes
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/148914

Tendo em vista a importância e o crescente interesse na produção de leite de búfala e seus derivados e da ocorrência de Staphylococcus coagulase negativa (SCN) como patógenos da mastite tanto em bovinos como em bubalinos. O presente estudo objetivou avaliar genes de virulência, a resistência a antimicrobianos, bem como metodologias para correta identificação destes SCN em ambiente de ordenha e no leite de bubalinos. Foram colhidas 320 amostras de leite de quartos mamários de 80 búfalas escolhidas aleatoriamente, 20 amostras de narinas e 20 amostras da boca dos bezerros bubalinos, 16 amostras das mãos dos ordenhadores e 64 amostras de insufladores das teteiras, coletadas durante a ordenha. Vinte e sete cepas de Staphylococcus coagulase negativa foram positivas para o gene eno, 10 para o gene ebps, 10 para o gene fnbA. Em relação aos genes relacionados com a produção de enterotoxinas, apenas uma cepa foi positiva para o gene sea, uma para o gene see e para os genes relacionados a resistência antimicrobiana, uma cepa foi positiva para o gene mecA. A identificação das espécies isoladas foi realizada utilizando-se a metodologia de MALDI-TOF MS e confirmada por iniciadores espécie-especifico desenhados neste estudo, exceto para S. agnetis o qual foi erroneamente identificado como S. hyiucs por espectofotometria de massa. Neste trabalho a identificação destas duas espécies foi confirmada por sequenciamento genômico de um isolado representativo. Foram observadas quatro amostras resistentes à clindamicina, nove à vancomicina, uma ao cloranfenicol, sete à rifampicina, quatro a cefepime, sete à oxacilina, 17 à penicilina, 13 à eritromicina, 15 ao cotrimoxazole e três à tetraciclina. Resistência a dois ou mais princípios ativos antimicrobianos simultaneamente foi observada em 21 isolados. Os principais SCN isolados foram os S. chromogenes, S. agnetis e S. epidermidis. A detecção de genes relacionados à adesão e à produção de enterotoxinas e toxinas do choque toxico tornam estas cepas um risco potencial à saúde pública. A técnica de MALDI-TOF MS permite o diagnóstico rápido e preciso para algumas espécies de SCN, entanto o método deve ser utilizado com precaução ao avaliar amostras veterinárias. Os iniciadores desenhados para o gene cydB neste estudo podem ser utilizados para PCR convencional ou em tempo real