Padronização de um protocolo para detecção molecular de Leptospira spp. e Brucella spp. em sêmen bovino comercial

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2010
Autor(a) principal: Fuverki, Renata Benício Neves [UNESP]
Orientador(a): Gírio, Raul José Silva [UNESP], Magajevski, Fernanda Senter [UNESP]
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Bovino - Semen
Leptospira
Brucella
Palavras-chave em Inglês:
Brucella
Bovine
DNA
Leptospira
PCR
Semen
Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/94627
Resumo: Com a crescente disponibilidade das biotécnicas de reprodução animal, o comércio dos produtos envolvidos com essas práticas também está em expansão, oferecendo a possibilidade de melhoria dos índices zootécnicos às produções de bovinos. Porém deve-se levar em consideração que há riscos sanitários em práticas como a inseminação artificial caso não se realize o controle do material biológico utilizado. Dentre os agentes infecciosos que podem estar presentes no sêmen e passíveis de serem transmitidos por esse estão a leptospirose e a brucelose, enfermidades responsáveis por grandes perdas reprodutivas e econômicas na bovinocultura mundial. Este projeto teve como objetivos detectar molecularmente esses patógenos em amostras de sêmen bovino provenientes de centrais de comercialização brasileiras, utilizando um kit comercial para extração de DNA (“RTP Bacteria DNA Mini Kit” (Invitek®), aperfeiçoá-lo para a extração de DNA bacteriano a partir de sêmen e avaliar sua aplicabilidade à rotina laboratorial. O DNA bacteriano foi extraído e quantificado por eletroforese em gel de agarose. Pretendeu-se também realizar reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando os “primers” B4 e B5 para amplificação do DNA de Brucella spp. e os “primers” Lep 1 e Lep 2 para Leptospira spp. O kit de extração foi otimizado com sucesso, e todas as 96 amostras examinadas foram negativas para qualquer DNA bacteriano. Os resultados podem ser úteis para estabelecer alternativas de controle sanitário em touros doadores de sêmen e permitir o fornecimento de material genético livre de patógenos, aumentando o “status” sanitário da reprodução de bovinos no Brasil
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Porém deve-se levar em consideração que há riscos sanitários em práticas como a inseminação artificial caso não se realize o controle do material biológico utilizado. Dentre os agentes infecciosos que podem estar presentes no sêmen e passíveis de serem transmitidos por esse estão a leptospirose e a brucelose, enfermidades responsáveis por grandes perdas reprodutivas e econômicas na bovinocultura mundial. Este projeto teve como objetivos detectar molecularmente esses patógenos em amostras de sêmen bovino provenientes de centrais de comercialização brasileiras, utilizando um kit comercial para extração de DNA (“RTP Bacteria DNA Mini Kit” (Invitek®), aperfeiçoá-lo para a extração de DNA bacteriano a partir de sêmen e avaliar sua aplicabilidade à rotina laboratorial. O DNA bacteriano foi extraído e quantificado por eletroforese em gel de agarose. Pretendeu-se também realizar reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando os “primers” B4 e B5 para amplificação do DNA de Brucella spp. e os “primers” Lep 1 e Lep 2 para Leptospira spp. O kit de extração foi otimizado com sucesso, e todas as 96 amostras examinadas foram negativas para qualquer DNA bacteriano. Os resultados podem ser úteis para estabelecer alternativas de controle sanitário em touros doadores de sêmen e permitir o fornecimento de material genético livre de patógenos, aumentando o “status” sanitário da reprodução de bovinos no BrasilWith the increasing disponibility of animal reproduction biotechniques, trading of products involved with these activities is also in expansion offering improving possibilities in zootecnic indexes of bovine herds. However, considerations should be taken about sanitary risks in practices like artificial insemination if any control is applied to this biological material. Among infectious agents that could be present and transmitted by semen are leptospirosis and brucellosis, diseases that are responsible for numerous reproductive and economic losses in world’s cattle culture. The goals of this project were to molecularly detect these pathogens in bovine semen samples from Brazilian artificial insemination centers using a commercial kit for DNA extraction (RTP Bacteria DNA Mini Kit (Invitek®), to improve it for extracting bacterial DNA from semen and to analyze its applicability in laboratory routine. Bacterial DNA was extracted and quantified by agarose gel electrophoresis. We also intended to realize polymerase chain reaction (PCR) using primers B4 and B5 for amplification of Brucella spp. DNA and primers Lep 1 e Lep 2 for Leptospira spp. DNA. The extraction kit was successfully optimized and all of 96 examined samples were negative for any bacterial DNA. Results could be useful to establish alternative measures of sanitary control in semen donors and to allow the supplying of genetic material free of pathogens, increasing sanitary status of bovine reproduction in BrazilConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)x, 39 f. : il.porUniversidade Estadual Paulista (Unesp)Alephreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPBovino - SemenLeptospiraBrucellaBrucellaBovineDNALeptospiraPCRSemenPadronização de um protocolo para detecção molecular de Leptospira spp. e Brucella spp. em sêmen bovino comercialinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessMedicina Veterinária - FCAVMedicina veterinária preventivaUniversidade Estadual Paulista (UNESP), Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, JaboticabalPublication3d807254-e442-45e5-a80b-0f6bf3a26e48virtual::123016-13d807254-e442-45e5-a80b-0f6bf3a26e48virtual::123016-11d32c792-b4ae-4bbe-a762-42ee3506e3e9virtual::306656-11d32c792-b4ae-4bbe-a762-42ee3506e3e9virtual::306656-1ORIGINALfuverki_rbn_me_jabo.pdfapplication/pdf380911https://repositorio.unesp.br/bitstreams/bd75ce37-4323-470a-8f73-fe3355d5c531/download1e3cde0d1d852b172186ddec592ea827MD51trueAnonymousREADTEXTfuverki_rbn_me_jabo.pdf.txtWritten by FormatFilter org.dspace.app.mediafilter.TikaTextExtractionFilter on 2023-12-31T06:16:02Z (GMT).Extracted texttext/plain80504https://repositorio.unesp.br/bitstreams/f003ccdf-e4ca-4534-821a-5d2f5023a815/download28792956a13c51ecf7ae3cff2d181743MD54falseAnonymousREADTHUMBNAILfuverki_rbn_me_jabo.pdf.jpgWritten by FormatFilter org.dspace.app.mediafilter.ImageMagickPdfThumbnailFilter on 2016-11-11T19:17:17Z (GMT).IM Thumbnailimage/jpeg4883https://repositorio.unesp.br/bitstreams/b1b488a6-95d5-4b47-b216-5aca1e4fcecc/downloadfbf4eb7e933946f95c8e9cf83e8fa44bMD53falseAnonymousREAD11449/946272026-08-05T05:01:26.022053Zopen.accessoai:repositorio.unesp.br:11449/94627https://repositorio.unesp.brRepositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestrepositoriounesp@unesp.bropendoar:29462026-08-05T05:01:26Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false
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