Produção recombinante do RBD do vírus SARS-CoV-2 e desenvolvimento de plataforma para bioprospecção de inibidores de fusão

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Reis, Aline [UNESP]
• Orientador(a): Costa, Paulo Inácia da [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: COVID-19; SARS-CoV-2; RBD; ACE2; Proteínas recombinantes; Atividade enzimática
• Palavras-chave em Inglês: Recombinant proteins; Enzymatic activity
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11449/256307

A COVID-19 é uma síndrome respiratória aguda grave de origem viral, tendo emergido em 2019 e evoluiu para uma pandemia global com cerca de 670 milhões de casos e 6,8 milhões de mortes registradas até 2023. Seus sintomas principais envolvem febre, tosse seca, fadiga, falta de ar, mialgia e distúrbios gastrointestinais, podendo ser fatal. O agente causador da COVID-19, denominado SARS-CoV-2, é um betacoronavírus envelopado de RNA positivo e dentre suas proteínas estruturais, a proteína Spike (proteína S) desempenha um papel crucial na infecção, ela possui o domínio de ligação ao receptor (RBD) que se liga à enzima conversora de angiotensina tipo 2 (ACE2), permitindo a fusão do vírus com as células hospedeiras. Apesar do rápido desenvolvimento e aplicação das vacinas, sua eficácia enfrenta desafios, como grupos não vacináveis, baixa adesão a doses de reforço, constante evolução do vírus e o aparecimento de sequelas pós infecção. Nesse cenário, é crucial investir em tecnologias além das vacinas, como antivirais, para combater a infecção e suas sequelas. Os inibidores de fusão são uma classe de antivirais que agem nas primeiras etapas da infecção, bloqueando a ligação e fusão do vírus as células hospedeiras, e desde o início da pandemia houve a busca intensa por esses fármacos. Uma das técnicas utilizadas para essa bioprospecção é a cultura de células com o vírus, que apesar de ser o padrão para testes de antivirais, é trabalhosa, de alto custo e que requer mão de obra especializada, além de representar riscos de biossegurança. Alternativas tecnológicas têm sido desenvolvidas para facilitar a triagem de antivirais, incluindo a plataforma proposta neste estudo. Baseada na atividade carboxipeptidase do receptor ACE2 e sua interação com o RBD, essa plataforma busca contribuir para a bioprospecção de inibidores de fusão contra o SARS-CoV-2, oferecendo uma abordagem, rápida, segura e mais barata. Através da produção recombinante do RBD em plataforma procariótica e ensaios fluorimétricos e enzimáticos o presente trabalho demonstrou que o RBD é capaz de aumentar a atividade enzimática da ACE2 em cerca de 6 vezes e que é possível utilizar essa modulação para realizar a triagem de inibidores de fusão bem como anticorpos neutralizadores.