Nanoemulsão para co-encapsulação de anfotericina B e micafungina: desenvolvimento, caracterização e avaliação do potencial terapêutico contra Candida auris

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Marena, Gabriel Davi [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Candida auris; Nanoemulsão; Anfotericina B; Micafungina; Infeção Sistêmica; Nanoemulsion; Amphotericin B; Micafungin; Systemic Infection
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11449/252526; https://lattes.cnpq.br/5021808609474028; https://orcid.org/0000-0002-4573-5743

Infecções sistêmicas causadas por Candida sp, principalmente as novas espécies como C. auris, têm aumentado nos últimos anos. Dos potenciais fármacos que podem ser empregados no tratamento, destacam-se a anfotericina B (AmB) e a micafungina (MICA); no entanto, a resistência antifúngica apresentada pelos microrganismos e os efeitos colaterais que os antifúngicos possuem limitam o seu uso na terapia. Desta forma, novas estratégias podem ser exploradas, como a incorporação destes fármacos em nanoemulsões (NE), com o objetivo de melhorar o perfil terapêutico. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antifúngico in vitro e in vivo da AmB e/ou da MICA incorporados em NE frente a Candida auris CDC B11903. As NEs foram compostas por 10% de óleo de girassol e colesterol (5:1) como fase oleosa, 10% de polioxietileno 20 cetil éter (Brij® 58) e fosfatodilcolina de soja (2:1) como tensoativo e 80 % de solução PBS como fase aquosa. As NE foram caracterizadas por ensaios de espalhamento dinâmico de luz (DLS), potencial zeta, análise de rastreamento de partículas (NTA) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). A estabilidade das nanoemulsões foi acompanhada por 100 dias em DLS. Foi validada uma metodologia analítica por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para quantificação de MICA e AmB e para os fármacos associados (MICAmB). Foi determinada a eficiência de encapsulação (EE) dos fármacos por HPLC e verificada a liberação in vitro das formulações. Posteriormente, realizou-se os ensaios biológicos in vitro utilizando a técnica de determinação da Concentração Mínima Inibitória (CMI90), Checkerboard, Time kill, ensaio de sorbitol e ergosterol e determinação do potencial anti-biofilme em diferentes tempos de formação. Foram realizados ensaios biológicos in vivo em modelo alternativo de Galleria mellonella para a determinação do potencial tóxico agudo e antifúngico e em camundongos com infecção sistêmica para a determinação da atividade antifúngica em tecidos. As NEs apresentaram diâmetro hidrodinâmico médio de 41,2 nm a 48,6 nm, índice de polidispersão (PDI) de 0,259 a 0,429 e o Potencial Zeta (PZ) de -4,7 mV a -3,6 mV. A concentração de partículas variou de 6,87 x 1013 a 1,98 x 1014 partículas /mL. A metodologia analítica foi desenvolvida e validada com sucesso, apresentando resultados satisfatórios de seletividade, linearidade, precisão, exatidão, limite de deteção e quantificação. A %EE para AmB, MICA em NE foram de 70 e 69 %, respectivamente e a EE de AmB e MICA em NEMA foi de 100 % e 44,7 %, respectivamente. A liberação dos fármacos incorporados nas NEs foi menor e mais lenta em comparação com o fármaco livre, variando de 62 a 100% de liberação após 24h de ensaio. Ensaios in vitro mostraram CMI90 mais baixo para fármacos livres. Houve sinergismo antimicrobiano entre MICA e AmB. Resultados promissores frente a biofilmes pré aderidos e formados foram observados após tratamento com os antifúngicos incorporados em NE, em especial frente aos biofilmes maduros. Ensaios de toxicidade aguda em larvas de G. mellonella mostraram que a NE diminuiu a toxicidade de AmB comparada com AmB livre. Os resultados de atividade antifúngica em modelo in vivo de G. mellonella mostraram que os fármacos incorporados em NE apresentaram melhor atividade terapêutica comparado aos fármacos livres. O ensaio em camundongos infectados evidenciou que as NEs potencializaram a ação antifúngica da AmB e MICAmB. Em conclusão, os resultados deste trabalham apontam o potencial das NE para incorporação de AmB e MICA no tratamento de infecções sistêmicas causada por C. auris.