Detecção e caracterização molecular de agentes transmitidos por vetores em aves silvestres no pantanal brasileiro

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Alabí Córdova, Amir Salvador [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: eng
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Anaplasmataceae; Aves selvagens; Diagnostico molecular; Filogenia; Biologia molecular; Parasitologia veterinária
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11449/295755; https://orcid.org/0000-0003-1515-5876

- O presente estudo avaliou, por meio de técnicas moleculares, a ocorrência e a diversidade genética dos agentes Anaplasmataceae, Bartonella spp., Hepatozoon spp. e Borrelia spp. em aves silvestres no Pantanal dos estados de Mato Grosso (MT) e Mato Grosso do Sul (MS). Para tanto, 500 amostras de sangue de aves silvestres capturadas no Pantanal de MT e MS, durante o mês de abril e entre os meses de agosto e novembro de 2019, foram submetidas à extração de DNA e ensaios de PCR em tempo real e convencional baseados nos genes groEL, gltA, dsb, região intergênica 23S-5S, omp-1 e sodB para agentes Anaplasmataceae, nuoG, gltA, rpoB, ftsZ, pap31 e ribC para Bartonella spp., 16S rRNA e flaB para Borrelia spp., 18S rRNA para Hepatozoon spp. e cox-1, 12S rRNA e 28S rRNA para filarídeos. Análises filogenéticas foram construídas para posicionar filogeneticamente as sequências obtidas. Como resultado, 37/500 (7,4%) aves foram positivas para Anaplasma spp. e 4 (0,8%) para Ehrlichia spp. no ensaio qPCR (groEL); além disso, 13 (2,6%) foram positivos na PCR para agentes Anaplasmataceae com base no gene 16S rRNA. As sequências de 16S rRNA de Ehrlichia spp. detectadas foram posicionadas próximas a Ehrlichia sp. Magellanica. As sequências dsb de Ehrlichia detectadas agruparam-se com Ehrlichia minasensis. Os genótipos 16S rRNA de Anaplasma spp. detectados foram agrupados com 'Candidatus Allocryptoplasma spp.'. Os genótipos 23S-5S detectados foram relacionados a Anaplasma phagocytophilum. Dezenove (3,8%) das 500 amostras de sangue de aves foram positivas em ensaio de qPCR para Bartonella spp. com base no gene nuoG. Com base nos resultados do BLASTn, enquanto 1 sequência nuoG, 2 ribC e 2 ITS (16S-23S rRNA) apresentaram alta identidade com Bartonella henselae, uma 16S rRNA e 2 ITS apresentaram alta identidade com Bartonella machadoae. Três amostras (0,6%) foram positivas na PCR para filarídeos. Enquanto uma das sequências de cox-1 detectadas agrupou-se com Cardiofilaria sp., a outra posicionou-se basal a Splendidofilaria spp. Além disso, protocolos previamente estabelecidos de qPCR microfluídica em tempo real foram padronizados para a detecção de agentes transmitidos por vetores em 282 amostras de sangue de aves coletadas no Pantanal do estado de Mato Grosso em 2022, visando amplificar os genes 16S rRNA para Anaplasma spp., ssrA para Bartonella spp., cytB para hemosporídeos, e LSU rRNA para filariídeos. Os resultados foram validados por ensaios de PCR baseados no gene 16S rRNA e região intergênica 23S-5S para Anaplasma spp., espaçador intergênico 16-23S rRNA, e genes nuoG, gltA, pap31, ribC, ftsZ, groEL e rpoB para Bartonella spp., cox-1, 12S rRNA e 18S rRNA para filarídeos e gene cytB para hemosporídeos. As seguintes taxas de positividade foram encontradas na qPCR microfluídica de alto rendimento: 18.2% para Anaplasma spp., 6.5% para Onchocercidae, 6.2% para Plasmodium spp., 5.09% para Haemoproteus spp. e 0.36% para Bartonella spp. DNA de Bartonella machadoae, Cardiofilaria spp., Aproctella spp. e filarídeo posicionado basalmente ao clado de Eufilaria spp. foi detectado por esta técnica de qPCR. Em conclusão, novos genótipos de Anaplasma foram detectados em aves do Pantanal. Bartonella spp. relacionadas a B. machadoae e B. henselae foram detectadas, pela primeira vez, em aves silvestres do Pantanal brasileiro. Este é o primeiro relato molecular de filariídeos Onchocercidae (Aproctella spp., Cardiofilaria spp., e filarídeos basais a Eufilaria spp. e Splendidofilaria spp.) em aves do Pantanal brasileiro. A qPCR microfluídica em tempo real de alto rendimento mostrou-se eficiente na triagem de agentes transmitidos por vetores em aves silvestres no Brasil, desde que sejam desenhados primers específicos para variantes genotípicas circulantes no território nacional.