Toll-Like recepctors (TLRs) and retinoic acid inducible gene – I (RIG-I) activation by viral analogs in bovine endometrial cells

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Carneiro, Luisa Cunha [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: eng
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Citocinas pró-inflamatórias; Imunidade; Útero; Vacas; Cows; Immunity; Proinflammatory cytokines; Uterus
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/134385

De modo geral, o objetivo deste estudo foi determinar se as células endometriais bovinas responderam a análogos virais de padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs) mediante a produção de citocinas pró-inflamatórias após ativadas pelos receptores “Toll-Like” (TLRs) no endossoma celular e no citoplasma celular pelo genes indutores de ácido retinóico tipo I (RIG-I). No primeiro experimento, amostras uterinas de vacas de corte mestiças pós-púberes foram dissectadas para obtenção de células endometriais epiteliais e estromais. Um controle negativo e quatro PAMPs: LPS, ssRNA, Poly I:C (LMW), Poly (I:C) HMW foram utilizados. Dois grupos de tratamentos (transfectados e não transfectados) foram analisados durante 24 horas. Em outro experimento, células endometriais foram tratadas apenas com o PAMP Poly (I:C) LMW e um grupo Controle Negativo. Neste, os grupos foram incubados às 0, 2, 6, 12, 24, 36, 48 e 72 horas. Sobrenadantes foram colhidos para desenvolver o teste de ELISA para IL-6 e IL-8. Células epiteliais produziram IL-6 em resposta ao Poly I:C (HMW) quando comparadas com o Controle (Grupo DOTAP positivo; P< 0.05), enquanto que o LPS induziu produção de IL-6 e IL-8 em células estromais (P< 0.05). O uso de um reagente de transfecção entre as células e tratamentos demonstrou efeito (P> 0.05). Ainda, células estromais tratadas por Poly I:C (LMW) demonstraram uma maior produção de IL-6 às 48 e 72 horas (P< 0.05), e para o IL-8 às 6, 12, 24, 36, 48 e72 horas quando comparadas com o grupo Controle (P< 0.05). No segundo experimento, outras amostras uterinas de vacas de corte pós-púberes foram utilizadas. A obtenção de células endometriais estromais e epiteliais foram isoladas pelo mesmo protocolo do primeiro experimento. O PAMP Poly (I:C) LMW e um controle negativo foram utilizados. Proteínas para o RIG-I e p65 foram colhidas após 12, 24, 48 e 72 horas de tratamento. Em resposta a Poly (I:C) LMW, células estromais ativaram o RIG-I às 48 hours (P< 0.05) quando comparadas com o grupo controle. Enquanto que, as células epiteliais não foram suficientemente estimuladas pelo Poly (I:C) LMW na ativação do RIG-I em nenhum momento testado (P> 0.05). A proteína p65 depois de estimulada pela Poly (I:C) LMW foi ativada às 12 horas pelas células estromais (P< 0.05) e às 24 horas pelas células epiteliais (P< 0.05). Conclui-se que, células endometriais bovinas foram essenciais na ativação das vias exercidas tanto pelos TLR como RIG-I com função de iniciar uma defesa imunológica contra infecções virais.