MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmaniose

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2023
Autor(a) principal: Costa, Sidnei Ferro [UNESP]
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Leishmaniose visceral
Cães
MicroRNAs
Genes
Imunologia
Visceral leishmaniasis
Dogs
MicroRNA
Immunology
Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/243166
Resumo: Os cães domésticos são os principais reservatórios urbanos de Leishmania infantum, o agente causador da leishmaniose visceral (LV). Na leishmaniose canina (CanL), a modulação da resposta imune do hospedeiro pode estar associada à expressão de pequenos RNAs não codificantes denominados microRNA (miR). A expressão do miR-194 aumenta em células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de cães com leishmaniose com correlação positiva com a carga parasitária. Estudamos CMSP de 5 cães saudáveis e 28 cães com leishmaniose. A expressão basal do miR-194 foi analisada utilzando qPCR. As CMSP foram transfectadas com Mimic e Inibidor sintéticos do miR-194 e cultivadas a 37º C, 5% de CO2 por 48 horas. A expressão de possíveis alvos do miR-194 foi analisada: iNOS, NO, T-Bet, GATA3 e FoxP3 foram analisadas por citometria de fluxo; a expressão gênica de TRAF6 foi analisada por qPCR, e o nível das citocinas IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ e TGF-β no sobrenadantes de cultura celular foi mensurada por Ensaio Imunoenzimático de Captura (ELISA). A carga parasitária foi analisada por citometria e qPCR. Ensaio funcional com Inibitor do miR-194 e bloqueio de IL-1β e avaliação da produção de NO também foram realizados. Transfecção com o mimic do miR-194 promoveu um aumento da carga parasitária. Não houve alterações significativas na expressão de T-bet, GATA3 ou FoxP3 com aumento ou inibição do miR-194. A inibição de miR-194 aumentou IL-1β e NO em CMSP de cães doentes, e o bloqueio de IL-1β após a inibição de miR-194 diminuiu os níveis de NO. Esses achados sugerem que o miR-194 é regulado positivamente em CMSP de cães com leishmaniose e regula positivamente a carga parasitária, possivelmente diminuindo a produção de NO dependente da IL-1β. Esses resultados aumentam nossa compreensão dos mecanismos moleculares de evasão da resposta imune pelo parasita e a identificação de possíveis alvos terapêuticos.
id UNSP_d09931400686e1772b0710181e5c8ca5
oai_identifier_str oai:repositorio.unesp.br:11449/243166
network_acronym_str UNSP
network_name_str Repositório Institucional da UNESP
repository_id_str
spelling MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmanioseMicroRNA-194 regulates parasitic load and IL-1β- dependet nitric oxide production in the peripheral blood mononuclear cells of dogs with leishmaniasisLeishmaniose visceralCãesMicroRNAsGenesImunologiaVisceral leishmaniasisDogsMicroRNAImmunologyOs cães domésticos são os principais reservatórios urbanos de Leishmania infantum, o agente causador da leishmaniose visceral (LV). Na leishmaniose canina (CanL), a modulação da resposta imune do hospedeiro pode estar associada à expressão de pequenos RNAs não codificantes denominados microRNA (miR). A expressão do miR-194 aumenta em células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de cães com leishmaniose com correlação positiva com a carga parasitária. Estudamos CMSP de 5 cães saudáveis e 28 cães com leishmaniose. A expressão basal do miR-194 foi analisada utilzando qPCR. As CMSP foram transfectadas com Mimic e Inibidor sintéticos do miR-194 e cultivadas a 37º C, 5% de CO2 por 48 horas. A expressão de possíveis alvos do miR-194 foi analisada: iNOS, NO, T-Bet, GATA3 e FoxP3 foram analisadas por citometria de fluxo; a expressão gênica de TRAF6 foi analisada por qPCR, e o nível das citocinas IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ e TGF-β no sobrenadantes de cultura celular foi mensurada por Ensaio Imunoenzimático de Captura (ELISA). A carga parasitária foi analisada por citometria e qPCR. Ensaio funcional com Inibitor do miR-194 e bloqueio de IL-1β e avaliação da produção de NO também foram realizados. Transfecção com o mimic do miR-194 promoveu um aumento da carga parasitária. Não houve alterações significativas na expressão de T-bet, GATA3 ou FoxP3 com aumento ou inibição do miR-194. A inibição de miR-194 aumentou IL-1β e NO em CMSP de cães doentes, e o bloqueio de IL-1β após a inibição de miR-194 diminuiu os níveis de NO. Esses achados sugerem que o miR-194 é regulado positivamente em CMSP de cães com leishmaniose e regula positivamente a carga parasitária, possivelmente diminuindo a produção de NO dependente da IL-1β. Esses resultados aumentam nossa compreensão dos mecanismos moleculares de evasão da resposta imune pelo parasita e a identificação de possíveis alvos terapêuticos.Domestic dogs are the primary urban reservoirs of Leishmania infantum, the causative agent of visceral leishmaniasis. In canine leishmaniasis (CanL), modulation of the host's immune response may be associated with the expression of small non-coding RNAs called microRNA (miR). MiR-194 expression increases in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of dogs with leishmaniasis with a positive correlation with parasite load. We studied PBMCs from 5 healthy dogs and 28 dogs with leishmaniasis. Basal expression of miR-194 was measured using qPCR. PBMCs were transfected with synthetic miR-194 mimic and inhibitor, and cultured at 37 ºC, 5% CO2 for 48 hours. Expression of possible targets iNOS, NO, T-Bet, GATA3, and FoxP3 were measured using flow cytometry; gene expression of TRAF6 was measured using qPCR, and level of cytokines IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ, and TGF-β in cell culture supernatants was measured using capture enzyme-linked immunosorbent assays. Parasite load was measured using cytometry and qPCR. Functional assays followed by IL-1β blockade and assessment of NO production were also performed. Transfection with miR-194 mimic promoted an increase in the parasite load. There were no significant changes in T-bet, GATA3, or FoxP3 expression with miR-194 enhancement or inhibition. Inhibition of miR-194 increased IL-1β and NO in PBMCs from diseased dogs, and blockade of IL-1β following miR-194 inhibition decreased NO levels. These findings suggest that miR-194 is upregulated in PBMCs from dogs with leishmaniasis and increases parasite load, possibly decreasing NO production via IL1β. These results contribute to our understanding of the mechanisms of immune evasion by the parasite and the identification of possible therapeutic targets.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)FAPESP: 19/14984-0.Universidade Estadual Paulista (Unesp)Lima, Valéria Marçal FelixUniversidade Estadual Paulista (Unesp)Costa, Sidnei Ferro [UNESP]2023-04-27T20:30:22Z2023-04-27T20:30:22Z2023-03-23info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11449/24316633004021075P8porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESP2025-06-07T05:03:53Zoai:repositorio.unesp.br:11449/243166Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestrepositoriounesp@unesp.bropendoar:29462025-06-07T05:03:53Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false
dc.title.none.fl_str_mv MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmaniose
MicroRNA-194 regulates parasitic load and IL-1β- dependet nitric oxide production in the peripheral blood mononuclear cells of dogs with leishmaniasis
title MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmaniose
spellingShingle MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmaniose
Costa, Sidnei Ferro [UNESP]
Leishmaniose visceral
Cães
MicroRNAs
Genes
Imunologia
Visceral leishmaniasis
Dogs
MicroRNA
Immunology
title_short MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmaniose
title_full MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmaniose
title_fullStr MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmaniose
title_full_unstemmed MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmaniose
title_sort MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmaniose
author Costa, Sidnei Ferro [UNESP]
author_facet Costa, Sidnei Ferro [UNESP]
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Lima, Valéria Marçal Felix
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.contributor.author.fl_str_mv Costa, Sidnei Ferro [UNESP]
dc.subject.por.fl_str_mv Leishmaniose visceral
Cães
MicroRNAs
Genes
Imunologia
Visceral leishmaniasis
Dogs
MicroRNA
Immunology
topic Leishmaniose visceral
Cães
MicroRNAs
Genes
Imunologia
Visceral leishmaniasis
Dogs
MicroRNA
Immunology
description Os cães domésticos são os principais reservatórios urbanos de Leishmania infantum, o agente causador da leishmaniose visceral (LV). Na leishmaniose canina (CanL), a modulação da resposta imune do hospedeiro pode estar associada à expressão de pequenos RNAs não codificantes denominados microRNA (miR). A expressão do miR-194 aumenta em células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de cães com leishmaniose com correlação positiva com a carga parasitária. Estudamos CMSP de 5 cães saudáveis e 28 cães com leishmaniose. A expressão basal do miR-194 foi analisada utilzando qPCR. As CMSP foram transfectadas com Mimic e Inibidor sintéticos do miR-194 e cultivadas a 37º C, 5% de CO2 por 48 horas. A expressão de possíveis alvos do miR-194 foi analisada: iNOS, NO, T-Bet, GATA3 e FoxP3 foram analisadas por citometria de fluxo; a expressão gênica de TRAF6 foi analisada por qPCR, e o nível das citocinas IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ e TGF-β no sobrenadantes de cultura celular foi mensurada por Ensaio Imunoenzimático de Captura (ELISA). A carga parasitária foi analisada por citometria e qPCR. Ensaio funcional com Inibitor do miR-194 e bloqueio de IL-1β e avaliação da produção de NO também foram realizados. Transfecção com o mimic do miR-194 promoveu um aumento da carga parasitária. Não houve alterações significativas na expressão de T-bet, GATA3 ou FoxP3 com aumento ou inibição do miR-194. A inibição de miR-194 aumentou IL-1β e NO em CMSP de cães doentes, e o bloqueio de IL-1β após a inibição de miR-194 diminuiu os níveis de NO. Esses achados sugerem que o miR-194 é regulado positivamente em CMSP de cães com leishmaniose e regula positivamente a carga parasitária, possivelmente diminuindo a produção de NO dependente da IL-1β. Esses resultados aumentam nossa compreensão dos mecanismos moleculares de evasão da resposta imune pelo parasita e a identificação de possíveis alvos terapêuticos.
publishDate 2023
dc.date.none.fl_str_mv 2023-04-27T20:30:22Z
2023-04-27T20:30:22Z
2023-03-23
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/11449/243166
33004021075P8
url http://hdl.handle.net/11449/243166
identifier_str_mv 33004021075P8
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidade Estadual Paulista (Unesp)
publisher.none.fl_str_mv Universidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UNESP
instname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)
instacron:UNESP
instname_str Universidade Estadual Paulista (UNESP)
instacron_str UNESP
institution UNESP
reponame_str Repositório Institucional da UNESP
collection Repositório Institucional da UNESP
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)
repository.mail.fl_str_mv repositoriounesp@unesp.br
_version_ 1854954551167156224

Registros relacionados