Correlações espermáticas e caracterização de um potencial biomarcador de fertilidade em seres humanos: proteína espermática SP22

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Rosa, Josiane de Lima [UNESP]
• Orientador(a): Kempinas, Wilma De Grava [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: análises seminais convencionais; análises seminais funcionais; espermatozoide humano; citometria de fluxo; biomarcador de fertilidade; human spermatozoa
• Palavras-chave em Inglês: SP22; Conventional seminal analyzes; functional seminal analyzes; flow cytometry; fertility biomarker
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/181835

A infertilidade afeta aproximadamente 15% dos casais em idade reprodutiva, sendo o homem responsável por cerca da metade dos casos. A diminuição da fertilidade masculina é devido a uma variedade de condições que incluem malformações congênitas, distúrbios genéticos e endócrinos, doenças infecciosas e inflamatórias, disfunção sexual e estilo de vida. A proteína espermática SP22 (sperm protein, 22kDa) tem demonstrado ser um biomarcador de fertilidade masculina, visto que, em ratos, está bem estabelecido que sua concentração, em extratos de espermatozoides da cauda epididimária, se correlaciona com a fertilidade desses gametas. No entanto, para incorporar essa proteína como um biomarcador em estudos epidemiológicos e clínicos são necessários dados quantitativos em humanos. Assim, o presente estudo teve por objetivos padronizar a técnica de quantificação e imunolocalização da proteína espermática SP22, investigar possíveis correlações entre parâmetros seminais convencionais e funcionais, de homens férteis e inférteis, com a concentração dessa proteína e avaliar o seu potencial preditivo como um biomarcador, não invasivo, de fertilidade. Para tanto foram realizados dois estudos observacionais: um do tipo caso-controle e outro do tipo seccional. O estudo caso-controle foi desenvolvido em amostras seminais de 44 voluntários da cidade de Botucatu e região, com idade entre 20 a 50 anos, que foram agrupados de acordo com a fertilidade: férteis (um ou mais filhos) e inférteis. Já o estudo seccional foi conduzido em amostras seminais de 12 pacientes inférteis atendidos pelo Centro de Reprodução Humana do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu - UNESP, também com idade entre 20 a 50 anos. Em ambos os estudos foram excluídos aqueles casais cujo fator feminino de infertilidade estava presente. Foram realizadas padronização de protocolos multiparamétricos para a avaliação funcional dos espermatozoides pela técnica de citometria de fluxo, análises seminais convencionais e funcionais, quantificação e imunolocalização da proteína espermática SP22. A correlação entre alguns parâmetros foi investigada. Este estudo recebeu aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade de Medicina de Botucatu - UNESP e os indivíduos incluídos forneceram consentimento por escrito. Os voluntários inférteis exibiram redução no volume e no número total de espermatozoides do ejaculado bem como no volume, concentração espermática e número total de espermatozoides pós swim-up. Tanto os voluntários inférteis como os pacientes inférteis apresentaram porcentagem menor de células com morfologia normal. A motilidade progressiva rápida foi outro parâmetro de qualidade seminal que se mostrou reduzida nos pacientes inférteis. Além das alterações em alguns parâmetros seminais, os voluntários inférteis também exibiram redução na concentração sérica do LH. As análises dos coeficientes de determinação indicaram que os protocolos multiparamétricos propostos são adequados. Apesar de não terem sido observadas diferenças significativas entre os grupos com relação aos parâmetros seminais funcionais, os danos na membrana plasmática foram positivamente correlacionados com a produção de ânion superóxido na matriz mitocondrial. A imunolocalização revelou que a SP22 está presente, dentre outros locais, no segmento equatorial da cabeça do espermatozoide. A análise da concentração dessa proteína, realizada até o momento, não foi significativamente diferente entre os voluntários férteis e inférteis bem como não foi correlacionada com nenhum dos parâmetros investigados. Portanto, a avaliação das amostras seminais remanescentes, inclusive utilizando anticorpos monoclonais altamente purificados por afinidade, que se encontra em andamento, será fundamental para complementar o presente estudo. De qualquer forma, este é um passo inicial importante no sentido de caracterizar a SP22 como um potencial biomarcador não invasivo preditivo de fertilidade/infertilidade em humanos, podendo vir a subsidiar estudos epidemiológicos e clínicos.