Proteômica do fluido folicular ovariano de ovelhas

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Souza, Alessandra Gomes
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Proteína; Ovelha; Foliculogênese; Proteoma; Folliculogenesis; Protein; Proteome; Ovine
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/194453

A interação que existe do líquido folicular com oócito serve para manter o mesmo e contribuir com o desenvolvimento oocitário. O objetivo deste estudo foi descrever o perfil de proteínas do líquido folicular ovariano de ovelhas em duas categorias de desenvolvimento dos folículos. Os ovários foram colhidos de um abatedouro e transportados até o laboratório. No laboratório, os ovários foram lavados com solução 0,9% NaCl, os folículos foram mensurados e classificados em duas categorias, folículos pequenos com diâmetro de < 4 mm e médios de ≥ 4 a 6 mm. O líquido folicular foi colhido por aspiração centrifugados a 800g por 10 minutos para retirada dos debris celulares e recentrifugados a 10.000g, durante 30 minutos a 4º C. A depleção de albumina foi conduzida e a concentração de proteínas totais foi mensurada pelo método de Bradford. Uma alíquota contendo 50 µg de proteína foi preparada para eletroforese unidimensional SDS-PAGE. A corrida foi interrompida quando as amostras atingiram o gel de separação e a digestão tríptica in gel foi realizada. Então, as amostras foram submetidas a espectrometria de massa com abordagem shotgun ESI-Q-TOF MS/MS. Os resultados foram submetidos à análise multivariada, por análise de componente principal (PCA), análise discriminante por mínimos quadrados parciais (PLS-DA) indicada pela pontuação VIP (projeção de importância variável – VIP score), dendrograma e ontologia gênica (função molecular, processo biológico e componente celular). Foi encontrado um total de 55 proteínas nos dois grupos, sendo 02 apenas no grupo < 4 mm e 13 no grupo 4 a 6 mm. A PCA identificou 2 grupos distintos, sendo a somatória de PC1 e PC2 > 50%. No VIP score foram encontradas 12 proteínas com α  1,5, sendo 2 mais abundantes no folículos com diâmetro < 4 mm e 10 nos folículos entre 4 a 6 mm. Concluindo-se que as proteínas descritas estão ligadas diretamente com o funcionamento do metabolismo folicular e desenvolvimento dos oócitos, participando do processo de ovulação e qualidade dos oócitos.