Síntese, caracterização e transfecção in vitro mediada por nanopartículas de diisopropiletilamina e dietilaminoetil-quitosana: efeito da massa molar na liberação de RNA de interferência
Ano de defesa: | 2017 |
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Tipo de documento: | Tese |
Tipo de acesso: | Acesso aberto |
Idioma: | por |
Instituição de defesa: |
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
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Programa de Pós-Graduação: |
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País: |
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Palavras-chave em Português: | |
Link de acesso: | http://hdl.handle.net/11449/150219 |
Resumo: | A quitosana, polímero catiônico de origem natural, biocompatível, biodegradável e de baixa toxicidade vem sendo largamente estudada e utilizada no desenvolvimento de vetores não-virais para uso em terapia gênica. Nesse estudo, derivados de quitosana foram modificados com grupos hidrofílicos dietilaminoetil (DEAE) e diisopropiletilamina (DIPEA) tendo como objetivo melhorar a eficiência de transfecção e a liberação do material genético no ambiente intracelular. Poliplexos dos derivados de quitosana com diferentes massas molares foram investigados em ensaios de transfecção in vitro realizados com células HeLa, utilizando siRNA SSB como agente silenciador. Os resultados obtidos mostraram bons níveis de silenciamento e bloqueio de expressão do RNAm SSB, apresentando, em algumas situações, eficiência superior aos vetores não-virais Lipofetamina®, TransIT-siQUEST® e PEI. Fatores que podem afetar a eficiência de transfecção como pH, massa molar, grau de ionização, tamanho dos poliplexos, potencial zeta e razão N/P foram avaliados. Tanto as quitosanas desacetiladas quanto os seus derivados mostraram níveis de viabilidade celular superiores a 80% em ensaios de citotoxicidade realizados com MTS-PMS. Os resultados sugerem que os derivados de quitosana sintetizados e caracterizados nesse estudo possuem características favoráveis que os habilitam como potenciais vetores não-virais para serem usados em terapia gênica. |
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Síntese, caracterização e transfecção in vitro mediada por nanopartículas de diisopropiletilamina e dietilaminoetil-quitosana: efeito da massa molar na liberação de RNA de interferênciaSynthesis, characterization and in vitro transfection mediated by nanoparticles of diisopropylethylamine and diethylaminoethyl chitosan: effect of molar mass on the release of interfering RNADerivados de quitosanasiRNAMassa molarTransfecção in vitroChitosan derivativesMolar massin vitro transfectionA quitosana, polímero catiônico de origem natural, biocompatível, biodegradável e de baixa toxicidade vem sendo largamente estudada e utilizada no desenvolvimento de vetores não-virais para uso em terapia gênica. Nesse estudo, derivados de quitosana foram modificados com grupos hidrofílicos dietilaminoetil (DEAE) e diisopropiletilamina (DIPEA) tendo como objetivo melhorar a eficiência de transfecção e a liberação do material genético no ambiente intracelular. Poliplexos dos derivados de quitosana com diferentes massas molares foram investigados em ensaios de transfecção in vitro realizados com células HeLa, utilizando siRNA SSB como agente silenciador. Os resultados obtidos mostraram bons níveis de silenciamento e bloqueio de expressão do RNAm SSB, apresentando, em algumas situações, eficiência superior aos vetores não-virais Lipofetamina®, TransIT-siQUEST® e PEI. Fatores que podem afetar a eficiência de transfecção como pH, massa molar, grau de ionização, tamanho dos poliplexos, potencial zeta e razão N/P foram avaliados. Tanto as quitosanas desacetiladas quanto os seus derivados mostraram níveis de viabilidade celular superiores a 80% em ensaios de citotoxicidade realizados com MTS-PMS. Os resultados sugerem que os derivados de quitosana sintetizados e caracterizados nesse estudo possuem características favoráveis que os habilitam como potenciais vetores não-virais para serem usados em terapia gênica.Chitosan, a natural biocompatible, biodegradable and low toxicity cationic polymer has been widely studied and used in the development of non-viral vectors for use in gene therapy. In this study, chitosan derivatives were modified with hydrophilic groups diethylaminoethyl (DEAE) and diisopropylethylamine (DIPEA) aiming to improve the transfection efficiency and the release of the genetic material in the intracellular environment. Poliplexes of chitosan derivatives with different molar masses were investigated in vitro transfection assays performed with HeLa cells using SSB siRNA as the silencing agent. The results showed significant knockdown of SSB mRNA expression for chitosan and its derivatives, presenting, in some situations, superior efficiency to the non-viral vectors Lipofetamina®, TransIT-siQUEST® and PEI. Factors that could affect transfection efficiency such as pH, molar mass, degree of ionization, nanoparticle size, zeta potential and N/P ratio were evaluated. Both deacetylated chitosan and its derivatives showed cell viability above 80% in MTS-PMS cytotoxicity assays. The results suggest that the chitosan derivatives synthesized and characterized in this study have favorable characteristics that enable them as potential non-viral vectors to be used in gene therapy.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)CNPq: 202848/2015-9Universidade Estadual Paulista (Unesp)Tiera, Márcio José [UNESP]Fernandes, Julio Cesar [UNESP]Universidade Estadual Paulista (Unesp)Souza, Ricchard Hallan Félix Viegas de [UNESP]2017-04-17T17:18:04Z2017-04-17T17:18:04Z2017-03-17info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11449/15021900088408733004153068P98796747160088337porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESP2023-12-11T06:19:22Zoai:repositorio.unesp.br:11449/150219Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestopendoar:29462023-12-11T06:19:22Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false |
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A quitosana, polímero catiônico de origem natural, biocompatível, biodegradável e de baixa toxicidade vem sendo largamente estudada e utilizada no desenvolvimento de vetores não-virais para uso em terapia gênica. Nesse estudo, derivados de quitosana foram modificados com grupos hidrofílicos dietilaminoetil (DEAE) e diisopropiletilamina (DIPEA) tendo como objetivo melhorar a eficiência de transfecção e a liberação do material genético no ambiente intracelular. Poliplexos dos derivados de quitosana com diferentes massas molares foram investigados em ensaios de transfecção in vitro realizados com células HeLa, utilizando siRNA SSB como agente silenciador. Os resultados obtidos mostraram bons níveis de silenciamento e bloqueio de expressão do RNAm SSB, apresentando, em algumas situações, eficiência superior aos vetores não-virais Lipofetamina®, TransIT-siQUEST® e PEI. Fatores que podem afetar a eficiência de transfecção como pH, massa molar, grau de ionização, tamanho dos poliplexos, potencial zeta e razão N/P foram avaliados. Tanto as quitosanas desacetiladas quanto os seus derivados mostraram níveis de viabilidade celular superiores a 80% em ensaios de citotoxicidade realizados com MTS-PMS. Os resultados sugerem que os derivados de quitosana sintetizados e caracterizados nesse estudo possuem características favoráveis que os habilitam como potenciais vetores não-virais para serem usados em terapia gênica. |
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