Efeito dos processamentos seminais na funcionalidade dos espermatozoides após a criopreservação

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Kussler, Ana Paula de Souza
• Orientador(a): Corleta, Helena von Eye
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Criopreservação; Preservação do sêmen; Espermatozóides; Inseminacao artificial; Biomarcadores
• Palavras-chave em Inglês: Semen; Seminal plasma; Sperm wash; Cryopreservation; Density gradient; Spermatozoa
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/199019

Introdução: A criopreservação seminal provoca danos significativos no espermatozoide, por isso diferentes métodos de criopreservação têm sido estudados. Objetivos: Comparar os efeitos do processamento pelo gradiente de densidade e o lavado com remoção do plasma seminal concomitantes a criopreservação nos parâmetros seminais, dano oxidativo, fragmentação do DNA, criocapacitação e integridade do acrossoma e mitocôndria. Método: A amostra seminal de 26 pacientes normozoospérmicos foi dividida em 3 partes, uma com plasma seminal, a segunda após realização do lavado e a terceira após seleção pelo gradiente de densidade. As amostras foram criopreservadas por no mínimo duas semanas e os parâmetros seminais, produção de ROS com a sonda DCF, a peroxidação da membrana plasmática com uso da sonda BODIPY, a fragmentação do DNA por TUNEL, a integridade do acrossoma pela sonda FITC/PSA, a desordem lipídica da membrana plasmática pela sonda Merocianina 540 e o potencial mitocondrial pela sonda JC1, foram avaliados por citometria de fluxo e analisados nas amostras antes da criopreservação e após o descongelamento. Resultados: O processamento pelo gradiente de densidade selecionou espermatozoides móveis, com morfologia normal e viáveis (p<0,05). A criopreservação afetou negativamente os parâmetros seminais nos processamentos, mesmo que a recuperação de espermatozoides seja menor no gradiente densidade após o descongelamento a motilidade progressiva, motilidade total, vitalidade e morfologia permaneceram superiores (p<0,05). O gradiente de densidade selecionou células com menor dano oxidativo, menor desordem lipídica da membrana plasmática, maior integridade do DNA e do acrossoma e com maior potencial mitocondrial (p<0,05). A 17 criopreservação não aumentou as ROS, a peroxidação lipídica da membrana plasmática nem dano ao DNA, paralelamente houve prejuízo ao acrossoma, à mitocôndria e a desordem lipídica da membrana plasmática. Conclusão: A criopreservação compromete significativamente os parâmetros seminais (motilidade, morfologia, viabilidade); e acarreta danos estruturais ao acrossoma e as mitocôndrias do espermatozoide. Em pacientes normozoospérmicos o gradiente foi capaz de selecionar espermatozoides de melhor qualidade (integridade do DNA, do acrossoma, da mitocôndria, peroxidação lipídica e da desordem lipídica da membrana plasmática) em comparação aos outros processamentos, sendo que este benefício foi mantido após o e congelamento/descongelamento das amostras.