Avaliação da capacidade de genes sintéticos em conferir tolerância às geadas em plantas

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Sulis, Daniel Barletta
• Orientador(a): Pasquali, Giancarlo
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Eucalyptus; Arabidopsis thaliana; Plantas transgênicas
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/233075

O gênero Eucalyptus pertence à família Myrtaceae e é composto em sua maioria por arbóreas florestais. Dentre outras aplicações, as espécies de Eucalyptus apresentam destaque na produção de papel e pastas de celulose. Entretanto, as baixas temperaturas registradas no inverno da região sul do Brasil e a ausência de tolerância ao frio e/ou ao congelamento na maioria das espécies de Eucalyptus limitam o crescimento e o desenvolvimento de plantas deste gênero. O desenvolvimento de linhagens híbridas como E. urophylla x E. globulus, combinando espécies de clima temperado e de clima tropical, tem resultado em sucesso no plantio de Eucalyptus em regiões subtropicais. Contudo, as baixas temperaturas e os recorrentes e irregulares eventos de geadas continuam a causar severos danos nas árvores e perdas na produtividade de madeira. Desta maneira, o objetivo proposto é testar a capacidade de genes sintéticos em conferir tolerância ao congelamento em plantas-modelo de Arabidopsis thaliana para que, futuramente, os mesmos possam ser empregados na obtenção de plantas transgênicas de Eucalyptus tolerantes às geadas. Baseados em trabalhos recentes publicados na literatura científica, foram selecionadas sequências promotoras responsivas ao frio e sequências codificadoras de proteínas potencialmente capazes de conferir tolerância ao congelamento. As sequências promotoras e codificadoras de proteínas, em conjunto com o terminador do gene codificador da enzima nopalina sintase de Agrobacterium tumefaciens, foram agrupadas em dois cassetes gênicos nomeados de PCOR15B-DaIRIP1-Tnos e PPpbec1- AnAFP-Tnos. As sequências nucleotídicas foram enviadas à empresa GenScript (EUA) onde foram sintetizadas e ligadas ao vetor plasmidial pUC57. Ambos os cassetes gênicos foram isolados do vetor pUC57 com o uso de enzimas de restrição. Posteriormente, os cassetes gênicos foram ligados ao plasmídeo pCAMBIA2300. As versões recombinantes de pCAMBIA2300 foram utilizadas para a transformação de plantas de A. thaliana via A. tumefaciens. Plantas transgênicas foram selecionadas por meio de resistência frente à canamicina e o estado de transgenia foi confirmado via Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Por fim, as linhagens obtidas foram avaliadas quanto à tolerância ao congelamento. Em paralelo, um método alternativo baseado em plasmídeos derivados de vírus foi avaliado para a obtenção de plantas de Eucalyptus expressando o gene repórter gfp. Futuramente, o método empregado poderá ser utilizado para a aquisição de plantas de Eucalyptus contendo genes de interesse.