Encapsulação de ditosilato de lapatinibe em nanocápsulas multiparede funcionalizadas com o anticorpo trastuzumabe : avaliação da atividade antitumoral

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Dallemole, Danieli Rosane
• Orientador(a): Pohlmann, Adriana Raffin
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Neoplasias da mama; Anticorpos monoclonais; Nanopartículas; Trastuzumab
• Palavras-chave em Inglês: Breast cancer; Monoclonal antibody; Receptor tyrosine kinase inhibitors; Nanoparticles
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/263301

Primeiramente, o objetivo desta tese foi realizar um levantamento bibliográfico sobre as aplicações biológicas das nanocápsulas de núcleo lipídico. Essa pesquisa resultou na elaboração de um artigo de revisão que contempla detalhes importantes sobre fatores metodológicos que influenciam nas características físico-químicas das nanocápsulas de núcleo lipídico, sua estrutura supramolecular, estratégias de marcação fluorescente e modificação de superfície. Posteriormente, desenvolvemos nanocápsulas de núcleo lipídico multiparede contendo o fármaco ditosilato de lapatinibe e funcionalizadas com anticorpo trastuzumabe (LAP-LNC+-TRAS), ambos inibidores do receptor tipo 2 do fator de crescimento epidérmico 2 (HER2). Além disso, avaliamos o seu potencial antitumoral in vitro, frente a linhagens de câncer de mama HER2 positivo. Isso porque, cerca de 20 a 30% dos cânceres de mama apresentam superexpressão HER2, os quais são caracterizados por serem invasivos e metastáticos. Nesse sentido, a formulação foi preparada por deposição interfacial de polímero pré-formado, seguido de revestimento com quitosana e complexação organometálica (utilizando Zn2+ como íon metálico) com trastuzumabe (LAP-LNC+-TRAS). A partir de um estudo de pré-formulação foi definida a concentração de anticorpo (200 μg mL-1) adequada para manter a estabilidade físico-química da partícula. Além disso, LAP-LNC+-TRAS apresentou formato esférico, com diâmetro médio <200 nm e baixa polidispersividade. O potencial zeta foi positivo, o teor de fármaco e a eficiência de encapsulação registrados foram próximos a 100%. A complexação do anticorpo à partícula foi verificada por cromatografia em papel. Modos vibracionais característicos das matérias-primas que compõem a formulação foram observados por FT-IR, além de alterações no entorno químico das partículas após a complexação com o anticorpo, demonstrando a interação do trastuzumabe com o sistema. In vitro, a formulação desenvolvida reduziu a viabilidade celular da linhagem SKBR3 (HER2 positivo). No ensaio de captação celular, a presença do anticorpo na superfície da partícula mostrou-se importante para o direcionamento e internalização do corante lipofílico incorporado às nanocápsulas. Embora a formulação desenvolvida tenha reduzido a viabilidade celular na linhagem HCC1954 (HER2 positiva, instrinsecamente resistente a inibidores de tirosina quinase) um efeito semelhante foi observado para formulações que não continham ditosilato de lapatinibe e trastuzumabe. O tratamento com LAP-LNC+-TRAS não alterou a expressão gênica de genes relacionados a morte celular por apoptose na linhagem HCC1954. Também verificamos que LAP-LNC+-TRAS é estável em fluidos gástrico e intestinal simulados, sendo que a presença do revestimento com quitosana foi importante para a manutenção do diâmetro de partícula. Esses achados abrem caminho para uma possível administração oral dessa partícula, além da via intravenosa. Em conclusão, demonstramos a viabilidade de obtenção da formulação LAP-LNC+-TRAS, ora inédita, e que apresenta a vantagem de combinar, em um mesmo nanocarreador, dois inibidores de HER2. Ademais, evidenciamos o potencial de LAP-LNC+-TRAS para o direcionamento ativo de fármacos e a sua ultização como uma possível estratégia para melhorar o tratamento do câncer de mama HER2 positivo. Consequentemente, esta partícula merece uma investigação mais aprofundada em novos estudos pré-clínicos.