Criopreservação de sêmen de abelhas-sem-ferrão - tubuna (Scaptotrigona bipunctata)

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Marques, Lis Santos
• Orientador(a): Streit Júnior, Danilo Pedro
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Abelha sem ferrão; Scaptotrigona bipunctata; Crioprotetores; Diluente de esperma; Qualidade do sêmen; Criopreservação
• Palavras-chave em Inglês: Stingless bees; Cryopreservation; Drone semen; Sperm viability; Cryobiology
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/294872

As abelhas-sem-ferrão desempenham um papel essencial na manutenção da biodiversidade e na sustentabilidade dos ecossistemas, atuando como polinizadores fundamentais. No entanto, diversas espécies desse grupo encontram-se ameaçadas, tornando urgente o desenvolvimento de estratégias eficazes de conservação. A criopreservação de sêmen surge como uma ferramenta promissora para a preservação genética, permitindo o armazenamento a longo prazo e a aplicação em inseminação artificial. Embora essa técnica seja amplamente utilizada em mamíferos e tenha sido aplicada em Apis mellifera, sua implementação em abelhas-sem-ferrão é praticamente inexplorada. O objetivo do presente estudo foi investigar um protocolo de criopreservação para o sêmen de tubuna (Scaptotrigona bipunctata), uma espécie de abelha-sem-ferrão de ampla distribuição no Brasil. Para isso, a pesquisa foi estruturada em duas frentes complementares: uma revisão sistematizada da literatura sobre criopreservação de sêmen em abelhas (Artigo 1) e um estudo experimental (Artigo 2) voltado ao desenvolvimento e à avaliação de um protocolo específico para essa espécie. O Artigo 1 analisou estudos sobre criopreservação de sêmen de zangões, abordando aspectos como os principais crioprotetores, métodos de congelamento e descongelamento e parâmetros utilizados para a avaliação da qualidade espermática após criopreservação. Os principais parâmetros analisados na literatura foram a motilidade e a integridade da membrana, os quais apresentaram alterações após o processo de criopreservação. Estudos indicam que a combinação de crioprotetores permeáveis, como dimetilsulfóxido e etilenoglicol, com crioprotetores não permeáveis, como trealose, pode mitigar esses danos e melhorar a viabilidade espermática. No Artigo 2, testou-se a eficácia de dois diluentes (Diluente 1: solução de Hayes, 0,15 M NaCl, 1,80 mM CaCl₂, 2,68 mM KCl, 1,19 mM NaHCO₃, pH 8,7, 352 mOsmol/mL; Diluente 2: solução de citrato de sódio, 82,21 mM Na citrato, 24,87 mM NaHCO₃, 5,34 mM KCl, 0,35 mM penicilina G sódica, pH 8,1, 280 mOsmol/mL) em amostras de sêmen frescas e criopreservadas. Nas amostras criopreservadas, foram adicionados os seguintes agentes crioprotetores: 0,7 M dimetilsulfóxido, 0,9 M etilenoglicol e 0,05 M trealose. O sêmen foi obtido por dissecação das vesículas seminais dos zangões e submetido ao congelamento em vapor de nitrogênio líquido. A viabilidade pós-descongelamento foi avaliada por meio de testes de motilidade espermática, integridade de membrana celular (LIVE/DEAD®) e atividade mitocondrial (ensaio MTT). Os resultados mostraram que as amostras frescas diluídas na solução de Hayes apresentaram a maior taxa de motilidade espermática (22,83%), significativamente superior às amostras criopreservadas, cujas taxas foram inferiores a 10%. A viabilidade celular também foi maior nas amostras frescas (87,35%) em comparação com as criopreservadas (57,73% para a solução de Hayes e 41,80% para o Diluente 2). Embora a criopreservação tenha reduzido a motilidade e a viabilidade espermática, a atividade mitocondrial foi preservada, sugerindo que a funcionalidade celular pode ser mantida, apesar das perdas estruturais. Este estudo representa um avanço na criopreservação de sêmen de abelhas-sem-ferrão, sendo o primeiro a demonstrar a viabilidade dessa técnica em S. bipunctata. Os resultados sugerem que a criopreservação pode ser aplicada na reprodução assistida dessas abelhas, contribuindo para programas de conservação genética e manejo sustentável.