Identificação e caracterização de fatores celulares do hospedeiro envolvidos na replicação do vírus Oropouche (OROV)

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Casaverde, Juan Oswaldo Concha
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Interação vírus-célula; Miosina Va; Myosin Va; Oropouche virus; Proteômica temporal; Rab27a; Temporal proteomics; Virus-cell interaction
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-24092025-112919/

O vírus Oropouche (OROV) é um arbovírus da família Peribunyaviridae, formada por um grande grupo de vírus de RNA. O OROV é o agente etiológico da febre de Oropouche, uma doença debilitante comum na região amazônica de países da América do Sul, que, recentemente, se espalhou para todas as cinco regiões geográficas do Brasil. Apesar de sua relevância epidemiológica, pouco se sabe sobre a biologia celular do OROV, especialmente no que diz respeito à relação entre o vírus e os fatores celulares necessários para a sua replicação e produção. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo inicial identificar proteínas da célula hospedeira envolvidas na externalização da progênie viral. Os resultados demonstraram que a pequena GTPase Rab27a desempenha um papel fundamental no transporte intracelular de compartimentos induzidos pelo OROV e na liberação viral das células infectadas. Foi observado que Rab27a interage fisicamente com as glicoproteínas do OROV e se colocaliza com proteínas virais nas fases tardias do ciclo de replicação. Além disso, a atividade de Rab27a mostrou-se importante para o direcionamento dos compartimentos virais à periferia celular e para a liberação eficiente de partículas infecciosas. Consistentemente, a depleção do efetor a jusante de Rab27a, Miosina Va, ou a inibição farmacológica da polimerização de actina também dificultaram o transporte dos compartimentos virais para a periferia e a liberação de partículas infecciosas. Esses achados indicam que o OROV sequestra a atividade de Rab27a para facilitar o transporte intracelular e a externalização viral. Em uma segunda etapa, o estudo buscou identificar de forma mais global outros fatores celulares que podem ser alvos do vírus. Para isso, foi realizada uma análise proteômica temporal quantitativa em células infectadas. Essa abordagem revelou diversas proteínas do hospedeiro cuja expressão é regulada negativamente ou positivamente em consequência da infecção pelo OROV. Entre as proteínas com expressão reduzida estão componentes das vias de sinalização JAK/STAT (JAK1 e STAT2) e NFkB (NFKBIE), além da subunidade A da RNA polimerase II (POLR2A), da proteína colágena (COL1A1) e da proteína precursora de beta-amilóide (APP). A redução na expressão de todas essas proteínas foi validada por western blot. Além disso, foram geradas diversas construções para a expressão das proteínas estruturais do OROV, e demonstrou-se que a expressão dessas proteínas não exerceu efeito sobre os níveis de POLR2A. Finalmente, usando vírus recombinantes deletados para as proteínas não estruturais foi demostrado que a proteína não estrutural NSs é responsável pela diminuição dos níveis de PolR2A, APP e das proteínas de resposta imune celular (JAK1, STAT2 e NFKBIE) no contexto da infecção pelo OROV.