Expressão e caracterização funcional do anticorpo de cadeia única NUsc7 anti-oligômeros do peptídeo β-amiloide

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2025
Autor(a) principal: Campos, Fernanda Marcon Barbosa
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Doença de Alzheimer
NUsc7
scFv
Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-18092025-164609/
Resumo: A doença de Alzheimer (DA), caracterizada clinicamente pela perda cognitiva, está associada no nível molecular ao acúmulo de agregados do peptídeo β-amiloide. Um robusto conjunto de evidências indica que oligômeros solúveis desse peptídeo (AβOs) são a forma mais neurotóxica e associadas à DA, porém a compreensão dos mecanismos que resultam na neurotoxicidade dos AβOs ainda é incompleta. Abordagens tendo os AβOs como alvo representam grande parte das estratégias terapêuticas e de diagnóstico para a DA em desenvolvimento e, neste contexto, a imunoterapia com anticorpos monoclonais anti-Aβ tem se mostrado uma das abordagens com maior potencial. Em trabalhos anteriores, nosso grupo descreveu um conjunto de anticorpos artificiais de cadeia única batizados de NUsc\'s, selecionados pela sua capacidade de reconhecimento seletivo de AβOs. Motivados por dados promissores com um desses anticorpos, NUsc1, nosso grupo tem expandido as análises para outros anticorpos do conjunto, como NUsc7. Neste trabalho o objetivo foi expandir a caracterização funcional de NUsc7. Descrevemos a expressão e produção bem-sucedidas de NUsc7 em sistema bacteriano na sua forma livre de fago, possibilitando a avaliação da sua capacidade de formação de complexo com AβOs. Realizamos uma análise comparativa das sequências codificantes de NUsc7 e NUsc1, incluindo das regiões determinantes da complementariedade (CDRs). A fim de se obter informações sobre a conformação desses anticorpos, a ferramenta Alphafold2 foi utilizada para a predição da estrutura tridimensional de NUsc1, focando na diversidade entre as regiões da CDR 3 da cadeia pesada (CDR H3). Com base nessas análises, realizamos a síntese em fase sólida do peptídeo correspondente à região da CDR H3 de NUsc1 e avaliamos de forma preliminar a interação entre o peptídeo e AβOs. Os dados obtidos nesse trabalho se somarão aos estudos de determinação do potencial de anticorpos NUsc\'s como estratégia terapêutica na DA, em andamento e já obtidos pelo nosso grupo de pesquisa.
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Em trabalhos anteriores, nosso grupo descreveu um conjunto de anticorpos artificiais de cadeia única batizados de NUsc\'s, selecionados pela sua capacidade de reconhecimento seletivo de AβOs. Motivados por dados promissores com um desses anticorpos, NUsc1, nosso grupo tem expandido as análises para outros anticorpos do conjunto, como NUsc7. Neste trabalho o objetivo foi expandir a caracterização funcional de NUsc7. Descrevemos a expressão e produção bem-sucedidas de NUsc7 em sistema bacteriano na sua forma livre de fago, possibilitando a avaliação da sua capacidade de formação de complexo com AβOs. Realizamos uma análise comparativa das sequências codificantes de NUsc7 e NUsc1, incluindo das regiões determinantes da complementariedade (CDRs). A fim de se obter informações sobre a conformação desses anticorpos, a ferramenta Alphafold2 foi utilizada para a predição da estrutura tridimensional de NUsc1, focando na diversidade entre as regiões da CDR 3 da cadeia pesada (CDR H3). Com base nessas análises, realizamos a síntese em fase sólida do peptídeo correspondente à região da CDR H3 de NUsc1 e avaliamos de forma preliminar a interação entre o peptídeo e AβOs. Os dados obtidos nesse trabalho se somarão aos estudos de determinação do potencial de anticorpos NUsc\'s como estratégia terapêutica na DA, em andamento e já obtidos pelo nosso grupo de pesquisa.Alzheimer\'s disease (AD), clinically characterized by cognitive loss, is associated at the molecular level with the accumulation of β-amyloid peptide aggregates. Robust evidences indicate that soluble oligomers of Aβ (AβOs) are the most neurotoxic form and associated with AD, but the understanding of the mechanisms that result in the neurotoxicity of AβOs is still incomplete. Approaches targeting AβOs represent a large part of the therapeutic and diagnostic strategies for AD under development, and in this context, immunotherapy with anti-Aβ monoclonal antibodies has been shown to be one of the approaches with the greatest potential. In previous studies, our group described a set of single-chain artificial antibodies named NUsc\'s, selected for their ability to selectively recognize AβOs. Motivated by promising data with one of these antibodies, NUsc1, our group has expanded the analyses to other antibody in the set, NUsc7. In this study, the objective was to expand the functional characterization of NUsc7. We describe the successful expression and production of NUsc7 in a bacterial system in its phage-free form, allowing the evaluation of its capacity to form a complex with AβOs. We performed a comparative analysis of the coding sequences of NUsc7 and NUsc1, including the determinant regions of complementarity (CDRs). In order to obtain information on the conformation of these antibodies, the Alphafold2 tool was used to predict the three-dimensional structure of NUsc1, focusing on the diversity between heavy chain CDR3 regions (CDR H3). Based on these analyses, we performed the solid-phase synthesis of the peptide corresponding to the CDR H3 region of NUsc1 and preliminarily evaluated the interaction between this peptide and AβOs. The data obtained in this work should contribute to the ongoing studies to determine the potential of NUsc\'s antibodies as a therapeutic strategy in AD.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPSebollela, Adriano SilvaCampos, Fernanda Marcon Barbosa2025-06-18info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-18092025-164609/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2025-12-04T18:40:04Zoai:teses.usp.br:tde-18092025-164609Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212025-12-04T18:40:04Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
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