Análise da expressão de genes alvos em homens com varicocele

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Souza, Mateus Felipe de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: EHMT2; Expressão gênica; Gene expression; HDAC2; Infertilidade masculina; Male infertility; PLP2; SPINT3; Varicocele
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-08092021-134749/

INTRODUÇÃO: A varicocele é uma das principais causas de infertilidade masculina. Alterações nos parâmetros seminais e baixa qualidade espermática são frequentemente observadas em homens com varicocele, cujos mecanismos envolvidos ainda não estão bem elucidados. A etiologia multifatorial, bem como a variação das manifestações clinicas e a possibilidade de reversão da doença, sugerem que os fatores genéticos, epigenéticos e ambientais podem estar associados a fisiopatologia da doença. OBJETIVO: Analisar os genes diferencialmente expressos em homens com varicocele utilizando dados de sequenciamento de RNA. MÉTODOS: Trata- se de um estudo prospectivo observacional do tipo caso controle, que incluiu 25 homens com varicocele e 25 homens com padrão seminal normal, sem a doença. Foi realizado o espermograma para a análise da qualidade seminal, e para a fragmentação de DNA a técnica de dispersão da cromatina. Os dados utilizados para as análises de bioinformática foram extraídos de um prévio sequenciamento de RNA. Os resultados obtidos foram analisados utilizando a linguagem de programação R, mais especificamente o pacote DESeq2 e clusterProfiler. Para a determinação de um gene diferencialmente expresso foram utilizados os filtros de p<0.05 e logFC > 1.5. O nível de expressão para os genes analisados foi calculado para cada amostra de acordo com o método de 2-&Delta;&Delta;CT, descrito por Livak e Scmittgen (2001). As comparações entre os grupos e as correlações entre as variáveis de interesse foram investigadas utilizando o coeficiente de correlação de Spearman. RESULTADOS: Observamos aumento das alterações morfológicas (p=0,0018) no grupo com varicocele quando comparado ao grupo controle. Não foi constatada diferença em relação à fragmentação de DNA espermático entre os grupos. Inicialmente encontramos 494 genes diferencialmente expressos entre homens com varicocele e férteis sem a doença, sendo 92 genes up regulated e 402 down regulated em varicocele. Para a seleção dos principais genes up e down regulated, os seguintes critérios foram adotados: Nível de expressão do gene, interação e co-expressão gênica, vias e funções associadas a varicocele. Seguindo esses critérios encontramos os genes alvos EHMT2 e HDCA2 down regulated, bem como os genes PLP2 e SPINT3, up regulated, para a análise da expressão gênica. Esses genes participam de vias e possuem diversas funções relacionadas a varicocele. A média da quantificação relativa do gene HDAC2 (p=0,0020) foi de 0,542 para o grupo varicocele, contra 1,506 do grupo controle. O gene PLP2 (p=0,0032) apresentou quantificação relativa de 0,227 no grupo varicocele e 0,739 no grupo controle. Além disso, quando correlacionamos nossos resultados do nível de expressão dos genes HDAC2 e PLP2 com os parâmetros seminais do grupo varicocele, nossos resultados mostraram uma fraca correlação negativa, entre o gene HDAC2 (p =-0,464) e a variável concentração. Na viável morfologia, os resultados mostraram uma correlação positiva moderada, tanto para o gene HDAC2 (p=0,601), quando para o gene PLP2 (p=0,507). CONCLUSÃO: A diminuição da expressão dos genes HDAC e PLP2, que participam de importantes vias relacionadas ao transporte de íons, manutenção das células germinativas, e espermatogêneses, podem conduzir as alterações seminais encontradas em pacientes com varicocele.