Vesículas extracelulares derivadas de células CAR-T: produção e caracterização em modelos experimentais e clínicos

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Corveloni, Amanda Cristina
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: CAR-T cells; Cell therapy; Células CAR-T; Extracellular vesicles; Immunotherapy; Imunoterapia; Nanoparticle tracking analysis (NTA); Terapia celular; Vesículas extracelulares

A terapia com células T geneticamente modificadas para expressar receptores de antígeno quimérico (CAR-T) revolucionou o tratamento de neoplasias hematológicas, embora ainda enfrente desafios como toxicidade, alto custo, complexidade de produção e eficácia limitada em tumores sólidos. Nesse contexto, vesículas extracelulares (VEs) derivadas de células CAR-T têm se destacado como uma estratégia promissora, com potencial terapêutico e logístico relevante. O objetivo deste estudo foi investigar estratégias de produção e caracterização de VEs derivadas de células CAR-T, considerando diferentes condições experimentais e clínicas. Inicialmente, foi desenvolvido e validado um protocolo para a produção de células CAR-T CD19-EGFR a partir de doadores saudáveis, utilizando ativação com beads anti-CD3/CD28, transdução lentiviral (MOI 3) e expansão com IL-2. As células apresentaram funcionalidade frente a linhagens tumorais CD19+, sem atividade frente a linhagens CD19-. A seguir, VEs foram isoladas após 48 horas de cultivo em diferentes concentrações de soro humano AB (0%, 2% e 5%). A análise por Nanoparticle Tracking Analysis (NTA) indicou que o diâmetro médio das VEs permaneceu estável, enquanto a concentração de partículas aumentou proporcionalmente ao teor de soro, sugerindo contribuição do suplemento para o perfil vesicular. Na etapa clínica, foram analisadas células CAR-T anti-CD19/CD20/CD22 de dez pacientes submetidos a um ensaio clínico. As amostras foram cultivadas com ou sem ativação (TransActTM) e mantidas em meio com soro até o dia 5, sendo então transferidas para cultivo em meio livre de soro até o dia 7. Essa estratégia permitiu avaliar a dinâmica de expansão celular ao longo do tempo e isolar as VEs durante as últimas 48 horas de cultivo, sob condição sem soro. Células T não transduzidas (NTTs) apresentaram baixa expansão na ausência de ativação, enquanto o estímulo com TransActTM promoveu aumento significativo. As células CAR-T apresentaram um perfil de expansão mais pronunciado e liberação variável de VEs, com tendência a maior concentração e diâmetro em relação às NTTs, embora com variações entre os pacientes. Os dados obtidos evidenciam que fatores como ativação, composição do meio e características do doador influenciam diretamente o perfil secretor das células CAR-T. Em conjunto, os resultados contribuem para a padronização de protocolos experimentais e clínicos voltados à obtenção de VEs, além de fornecerem subsídios para futuras investigações sobre seu potencial como ferramenta terapêutica ou biomarcador funcional em imunoterapia acelular.