Utilização de exossomos para melhoria da viabilidade de células-tronco derivadas da membrana amniótica canina

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Scassiotti, Rodrigo Ferreira
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Exosomes; Exossomos; Fetal membranes; Membranas fetais; Mesenchymal; Mesenquimais; Microvesicles; Microvesículas
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74135/tde-23022022-084035/

Estudar o processo de comunicação e diferenciação celular é fundamental para o melhor entendimento do organismo como um todo. Para tanto, se faz necessário entender a interação entre células que ocorre por meio da comunicação e transporte de proteínas, lipídeos e materiais genéticos, realizada através da secreção de vesículas extracelulares, como os exossomos. Assim, este trabalho tem por principal objetivo avaliar o efeito da suplementação basal de exossomos em culturas celulares com células-tronco mesenquimais (CTM) amnióticas canina. Foi realizado o isolamento de células derivadas do tecido amniótico de cães, cultura e cultivo das mesmas com meio DMEM suplementado por soro fetal bovino, antibiótico, antifúngico e aminoácidos essenciais, até que atingissem de 80 a 90% de confluência, quando então era realizada nova passagem celular. Também foi realizada a determinação de curva de crescimento. Posteriormente, as células foram caracterizadas e diferenciadas em linhagem adipogênica, condrogênica e osteogênica. Realizou-se o isolamento de vesículas extracelulares através de protocolo de ultracentrifugação e caracterização das mesmas por Nanosight. Exossomos foram suplementados a culturas basais de CTM, padronizadas em placas de 12 poços com concentração de 3x104 células por poço, em triplicata técnica e biológica, para avaliação de alterações em padrões de curva de crescimento, determinando-se assim sua capacidade de melhoria em viabilidade celular em passagens naturalmente ineficientes. Os resultados demonstraram um aumento de 15 a 20% na taxa de expansão dos cultivos suplementados com vesículas extraídas em passagens P1 e P2, quando comparadas ao grupo controle, bem como uma maior resistência ao processo de apoptose celular. Tal resultado foi corroborado por análise estatística através de Teste de Dunnett, com p≤0.5, comprovando a correlação positiva entre a suplementação e taxa de expansão, indicando, desta forma, não só a importância dos exossomos no processo de comunicação celular, mas também a viabilidade de um protocolo de suplementação de cultivos para fins terapêuticos.