Otimização da produção de partículas semelhantes ao vírus rábico utilizando estratégia de dois baculovírus recombinantes monocistrônicos em células Sf9

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Guardalini, Luis Giovani de Oliveira
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Baculovírus recombinante; Glicoproteína; Glycoprotein; Matrix protein; Partículas semelhantes ao vírus da raiva; Proteína de matriz; Rabies virus-like particles; Recombinant baculovirus
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-14052024-093736/

O controle da raiva tem sido um desafio global. Enquanto países em desenvolvimento continuam implantando medidas básicas da prevenção da raiva humana e animal, países em que a raiva é uma infecção controlada no meio urbano buscam maneiras eficazes de combatê-la no ambiente silvestre. As vacinas disponíveis para a prevenção ou tratamento após a infecção são comprovadamente eficazes, porém apresentam elevado custo de produção e riscos de biossegurança. Uma preparação vacinal eficaz que combine elevada resposta imune mediada por anticorpos neutralizantes, com um nível satisfatório de resposta imune celular, pode levar à proposição de uma nova e mais potente vacina contra a raiva. Diversas tecnologias podem dar origem a essa preparação, sendo que a obtenção de uma vacina baseada em partículas semelhantes a vírus (VLPs) ou pseudopartículas, contendo a glicoproteína imunogênica do vírus da raiva e a proteína de matriz do vírus da raiva, constitui-se em uma estratégia muito promissora. A utilização de baculovírus recombinante/célula de inseto como sistema de expressão é uma estratégia que pode levar a um padrão de resposta imune protetor e tem sido bastante utilizado em outras vacinas. O presente trabalho se ateve em estudar as melhores condições de coinfecção dos baculovírus recombinantes em células Sf9 a fim de se maximizar a produção de VLPs da raiva, definindo os valores ótimos de MOI (entre 0,1 e 12 pfu/cel), TOI (entre 0 e 36h), TOH (entre 24 a 120h) e razão entre os MOIs da coinfecção (entre 1,5 a 2,5). Simultaneamente foram realizados estudos cinéticos de crescimento, infecção e metabólicos das células Sf9. Dessa forma, foi construído um sistema de baculovírus recombinante capaz de produzir VLPs contendo a glicoproteína (RVGP) e a proteína de matriz (RVM) do Lyssavírus rábico em células de Spodoptera frugiperda através da transposição dos genes de interesse no material genético encurtado do baculovírus, que é capaz de infectar as células Sf9, gerando a expressão das proteínas de interesse. Os sistemas de cultura em frascos Schott (100 mL, 20 mL de volume de trabalho) e Erlenmeyer (500 mL, 150 mL volume de trabalho) foram utilizados para realizar os estudos de otimização através de delineamentos estatísticos experimentais multivariados. Nas condições ótimas definidas nestes sistemas foram realizados experimentos confirmatórios em biorreator com volume de trabalho de 1L. Através de modelagem matemática foram definidos os valores ótimos para a coinfecção, tendo sido o MOI de BVG de 4,8 pfu/cel, BVM de 2,3 pfu/cel, TOH de 108 horas e TOI de 24 a 35 horas. Os experimentos em biorreator mostraram resultados promissores para a continuidade do desenvolvimento desta tecnologia de produção de VLPs da raiva.