O papel de Maspina na regulação do citoesqueleto de células epiteliais

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Silva, Luiz Eduardo da
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: actin; actina; citoesqueleto; cytoskeleton; epithelial-mesenchymal transition; Maspin; Maspina; transição epitélio-mesenquimal; tubulin; tubulina
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-15042025-122130/

A homeostase epitelial é mantida por uma rede composta pelos três principais componentes do citoesqueleto associados a uma série de proteínas acessórias. Em células epiteliais, essa rede é principalmente conectada aos diferentes tipos de adesões celulares através de proteínas adaptadoras e moléculas de adesão. Essa organização possibilita regular a coesão e tensão entre as diferentes células que compõem o tecido epitelial. O citoesqueleto possui papel fundamental nessa rede, visto que controla a morfologia celular e contribui para processos básicos como a adesão, migração, divisão celular, entre outros. Compreender quais proteínas compõem esta complexa rede e como ela é regulada é de fundamental importância, uma vez que desvios na sua função contribuem para doenças como o câncer. A proteína Maspina pertence à família das serpinas e foi inicialmente caracterizada como uma supressora tumoral em células epiteliais. Maspina regula processos como adesão, migração, invasão, transcrição gênica, estresse oxidativo e apoptose. Apesar de alguns de seus ligantes serem conhecidos, os mecanismos moleculares pelos quais a proteína atua permanecem incertos. Neste trabalho, investigou-se o papel de Maspina na regulação dos microfilamentos e microtúbulos de células epiteliais. Para isso, combinamos - ensaios de purificação por afinidade seguido de análise proteômica, análise in silico de interações proteína-proteína, ensaios de reconstituição in vitro e avaliação da localização in situ da proteína - para confirmar que Maspina interage com o citoesqueleto de células epiteliais. Em seguida, analisamos o papel funcional da proteína sobre o citoesqueleto por imunofluorescência e microscopia time-lapse em clones de células epiteliais nocaute para Maspina. Os resultados obtidos demonstraram que esta é responsável pela regulação espacial do citoesqueleto durante a intérfase e na mitose. Para entender como Maspina regula molecularmente esses efeitos, avaliamos a sua atuação sobre os microtúbulos nas células e in vitro, o que resultou na observação de que a proteína regula negativamente o crescimento dos microtúbulos. Em paralelo, dados compilados na literatura mostraram que Maspina intracelular também interage com moléculas de adesão. Na ausência de Maspina, as células epiteliais progridem para um estado intermediário na transição epitélio-mesenquimal, como confirmado por alterações morfológicas, no citoesqueleto e por marcadores mesenquimais. Em conjunto, esses dados sugerem que Maspina seja responsável pela manutenção da homeostase epitelial a partir de sua interação com os sítios de adesão e com o citoesqueleto, atuando como uma molécula adaptadora. Uma melhor caracterização dos mecanismos moleculares envolvendo esta proteína, como este trabalho mostrou, pode contribuir para a elucidação do seu papel no contexto tumoral e, por consequência, para o desenvolvimento de novas estratégias de intervenção farmacológica no câncer.