Caracterização da quinase CRK1 (Cdc2 Related Kinase) na proliferação celular e na metaciclogênese de Trypanosoma cruzi.

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Corrêa, Artur da Paixão
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Cell cycle; Ciclo celular; Diferenciação; Differentiation; Protein; Proteína; Regulação; Regulation; Tripanosomatídeo; Trypanosomatid
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24102025-132857/

Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado causador da doença de Chagas, endêmica nas Américas. Ele possui um ciclo de vida complexo, alternando entre formas especializadas em replicação e infecção, sendo essa transição influenciada por diferentes fatores ambientais como pH, osmolaridade, composição iônica e disponibilidade de nutrientes. Nos eucariotos modelos são as CDK as responsáveis pela regulação e diferenciação celular, cuja atividade é modulada de acordo com as necessidades da célula. Embora não se compreenda os estímulos que deflagram as mudanças celulares observadas nas transições entre as formas evolutivas de T. cruzi, sabe-se que nos tripanosomatídeos são as Cdc2 Related Kinase (CRK) as responsáveis pela regulação do ciclo celular. Nesse sentido, o presente trabalho trouxe como escopo principal investigar e caracterizar a quinase CRK1, homóloga de CDK1, ao longo do ciclo celular e na metaciclogênese de T. cruzi, bem como seu repertório de interatoras. Através da tecnologia de edição genética CRISPR/Cas9 foi possível gerar linhagens da cepa Dm28c que expressam as etiquetas NeonGreen e TurboID conjugadas à quinase CRK1. A expressão e localização de CRK1 foi realizada através da etiqueta NeonGreen, enquanto a identificação das moléculas interatoras de CRK1 foi realizada através do método de rotulagem de proteína (TurboID). A proteína CRK1 demonstrou ser expressa em todas as fases do ciclo celular de T. cruzi, com localização comumente citoplasmática, por vezes apresentando localização mitocondrial e nunca nuclear. A rotulagem de proteína mediada pelo TurboID, ainda que preliminar, apontou interação de CRK1 com proteínas envolvidas na montagem de vesículas de clatrina (envolvidas no trans-Golgi), remodelamento de microtúbulos (durante a fase G1), regulação da maturação de RNA mitocondrial, proteólise de aminoácidos e produção de substratos para a síntese de proteínas entre outras. Esses resultados ampliam o conhecimento sobre a expressão e localização de CRK1 ao longo do ciclo celular e metaciclogênese de T. cruzi, além de sugerir novas direções para pesquisas futuras, com o objetivo de compreender melhor as funções multifacetadas desta quinase e sua influência no ciclo celular do parasito.