Própolis vermelha: desenvolvimento de métodos analíticos e validação por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Pinheiro, Ana Maria de Freitas
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Controle de qualidade; Desenvolvimento e validação analítica; Development and analytical validation; LC-MS; Propolis; Própolis; Própolis vermelha; Quality control; Red propolis
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-03122024-161230/

A própolis vermelha é uma das mais relevante no Brasil, a qual é encontrada principalmente na região nordeste. Suas principais fontes botânicas são a Dalbergia ecastaphyllum (L.) Taub e Symphonia globulifera L.f. A própolis vermelha e alguns de seus compostos isolados têm diversas propriedades biológicas comprovadas, tais como antibacteriana, antifúngica, antioxidante e anti-inflamatória. Sendo assim, é de extrema importância que o extrato da própolis vermelha e seus produtos sejam padronizados para garantir a segurança e a qualidade no consumo dos mesmos. Para tanto, se faz necessário o desenvolvimento e a validação de métodos analíticos. Neste trabalho foram desenvolvidos dois métodos para análise dos compostos da própolis vermelha, um para os flavonoides/pterocarpano e outro para as benzofenonas. Os flavonoides analisados foram: liquiritigenina, calicosina, isoliquiritigenina, formononetina, vestitol, neovestitol, biochanina A e o 7-O-metilvestitol. O pterocarpano analisado foi a medicarpina. As benzonfenonas foram: oblongifolina B e a mistura de gutiferona E e xantoquimol. Os métodos foram desenvolvidos no equipamento de Cromatografia Líquida de Ultra Eficiência acoplado à Espectrometria de Massas (UPLC-MS/MS), equipado com fonte de ionização eletrospray (ESI), operando nos modos positivo e negativo. Foram avaliados e otimizados os seguintes parâmetros para cada composto: modo de ionização, Monitoramento de Reações Múltiplas (MRM), energia de colisão e voltagem do cone. Foram selecionadas as condições nas quais os compostos tinham maior eficiência de ionização e as transições de fragmentação mais intensas. Utilizou-se a coluna Ascentis Express F5 (100 x 2,1 mm, 2,7 µm) e pré-coluna Ascentis Express F5 (5 mm x 2,1 mm, 2,7 µm) em ambos os métodos. Para o método dos flavonoides/pterocarpano foi utilizada fase móvel de 0,1% ácido fórmico em água (solvente A) e 0,1% ácido fórmico em metanol (solvente B), eluição por gradiente, com vazão de 350 µL/min e volume de injeção de 5 µL. O solvente B passou de 30% - 100% em 10 min; manteve-se em 100% até 12 min; passou de 100% para 30% até 13 min e manteve-se em 30% até 18 min, recompondo a condição inicial. No caso das benzofenonas, a fase móvel consistiu-se em ácido fórmico 0,1% em água (solvente A) e ácido fórmico 0,1% em acetonitrila (solvente B) com vazão de 300 µL /min e volume de injeção de 5 µL. O método foi realizado em modo isocrático com 55% de solvente B e 45% de solvente A por 25 min. Este método apresentou seletividade e permitiu a separação cromatográfica dos isômeros oblongifolina B, gutiferona E e xantoquimol. Neste trabalho foi possível validar o método dos flavonoides/pterocarpano, no qual foram avaliados os parâmetros de seletividade, efeito matriz, faixa de trabalho, linearidade, limite de quantificação, precisão, exatidão e robustez. O método dos flavonoides/pterocarpano foi validado com base nos guias analíticos da ANVISA e ICH, permitindo a quantificação dos compostos em extratos de própolis vermelha com confiabilidade dos resultados.