Estudos moleculares e fenotípicos de isolados clínicos de Cryptococcus spp. da macrorregião de Ribeirão Preto, São Paulo-Brasil

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Alves, Adriana Rodrigues
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Antifungal susceptibility; Azole resistance; Criptococose; Cryptococcosis; Cryptococcus spp.; Fatores de virulência; Galleria mellonella; Resistência aos azóis; Susceptibilidade aos antifúngicos; Virulence factors
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-26112024-174836/

A criptococose é uma micose sistêmica causada pelo fungo leveduriforme encapsulado do gênero Cryptococcus. Existem duas principais espécies patogênicas ao homem: Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, sendo estas subdivididas em oito tipos moleculares (VNI, VNII, VNII, VNIV, VGI, VGII, VGIII e VGIV). Apesar do sítio primário da criptococose ser o pulmão, a doença pode se disseminar e atingir o sistema nervoso central, podendo resultar em meningoencefalite, que é a forma mais grave e letal da doença. Alguns dos fatores de virulência de Cryptococcus spp. são a cápsula polissacarídica, melanina e biofilme. Além disso, a resistência aos antifúngicos de algumas linhagens de Cryptococcus spp. é um fator que dificulta o tratamento da doença, a qual pode ser gerada devido a alterações no gene ERG11 ou em proteínas de membrana. Assim, com o intuito de caracterizar isolados clínicos de Cryptococcus spp. da região nordeste do estado de São Paulo, um estudo retrospectivo por conveniência foi realizado com 64 cepas isoladas de 38 pacientes com criptococcose do HCFMRP-USP, sendo 63,2% (n=24/38) dos pacientes sorotipo HIV positivo. Neste estudo, foi realizada a identificação fenotípica e molecular das espécies e tipos moleculares dos isolados clínicos de Cryptococcus spp. e respectiva susceptibilidade aos antifúngicos AMB, FLU, ITR, VOR e 5-FC. Além disso, aspectos relacionados à virulência como a adesão celular e a análise de virulência em Galleria mellonella também foram investigados. Adicionalmente, foram analisadas mutações no gene ERG11, a heterorresistência e a expressão dos genes ERG11 e MDR1. A identificação fenotípica e molecular mostra que 87,5% (n=56/64) dos isolados clínicos são C. neoformans, sendo que 98% (n=55/56) do tipo molecular VNI e 2% (n=1/56) do tipo molecular VNII. C. gattii do tipo molecular VGII representa 12,5% (n=8/64) dos isolados clínicos. A infecção por C. neoformans ocorreu com maior frequência (95,8%; n=23/24) em indivíduos sorotipo HIV positivo e portanto com provável imunocomprometimento. Já a infecção por C. gattii ocorreu com maior frequência em pacientes imunocompetentes. Os antifúngicos AMB, FLU e ITR apresentaram CIMs ≥ ECV, isto é, possível resistência aos azóis, para 28,1% (n=18/64), 5% (n=3/64) e 28,1% (n=18/64) dos isolados clínicos, respectivamente. Entretanto, não foram encontradas mutações no gene ERG11 que estejam associadas às CIMs dos azóis acima do ECV. Na análise de virulência foi observado que não houve correlação entre o fator de virulência adesão com a virulência dos isolados clínicos no modelo experimental G. mellonella. Os isolados clínicos testados apresentaram heterorresistência e a expressão dos genes ERG11 e MDR1 foi heterogênea, o que demonstra um caráter multifatorial de resistência.