Caracterização de células endometriais humanas em sistema 3D: o modelo e suas possibilidades de estudo

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Souza, Bárbara Stefany da Silva
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: células estromais; Endométrio; Endometrium; epitélio uterino; extracellular matrix; matriz extracelular; stromal cells; trofectoderma; trophectoderm.; uterine epithelium
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-27062024-121412/

Introdução: A modelagem in vitro de um sistema de cocultivo tridimensional (3D), utilizando células endometriais humanas e eventualmente células embrionárias é uma área inovadora que surge com a possibilidade de aumentar o conhecimento da fisiologia endometrial e da implantação embrionária. Objetivos: Caracterizar um modelo de estudo 3D com células endometriais que permitam estudos da fisiologia uterina. Material e métodos: Células endometriais foram isoladas de biópsias uterinas femininas (n=3), coletadas de acordo com protocolos de ética em pesquisa humana (IC-USP, CONEP). As biópsias foram digeridas com colagenase II/DNAse I e filtradas para retenção das glândulas endometriais. Estas foram tripsinizadas para obtenção de células epiteliais isoladas. Esferas magnéticas anti-CD105 (MACS) foram usadas para a seleção positiva e negativa de células endoteliais e estromais, respectivamente. A pureza das amostras uterinas foi avaliada por imunofluorescência/ imunohistoquímica para as seguintes proteínas: vimentina, citoqueratina, IGFBP1 e CD105/VEGFR2. O sistema de cocultura 3D incluiu a preparação de uma matriz extracelular composta por uma mistura de fibronectina, ácido hialurônico, colágeno V, colágeno I e colágeno III em um sistema Transwell contendo células estromais, sobre a qual as células endoteliais e epiteliais foram plaqueadas. Como um ensaio preliminar, trofectoderma de embriões aneuploides (n=3) foram coletados e inseridos sobre as células endometriais cultivadas em sistema 3D, onde permaneceram por 48 horas e então foram processados para análise histológica. Resultados: O isolamento, cultivo e preparo da matriz de suporte foram padronizados e as culturas caracterizadas. O endométrio reconstituído foi caracterizado morfologicamente por coloração H&E e imunohistoquímica mostrando uma organização típica em que células vimentina-positivas se mantinham viáveis e embebidas pela matriz extracelular. Células endoteliais e epiteliais depositadas sobre essa matriz se organizaram sob a forma de uma monocamada. Apenas um fragmento embrionário constituído por trofectoderma apresentou aderência às células endometriais. Conclusão: O sistema de cocultivo apresentou células endoteliais, epiteliais e estromais viáveis, com características semelhantes às observadas in vivo, no que tange a sua organização tecidual e a expressão de biomarcadores típicos. A adesão do trofectoderma a esta camada sugere que mecanismos associados à implantação embrionária podem ser estudados neste modelo.