Toxoplasma gondii em amostras de água de reuso: proposta de método de detecção e quantificação por PCR quantitativo em tempo real (qPCR)

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Bastos, Veridiana Karmann
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Amostra Ambiental; Environmental Sample; qPCR; Toxaplasma gondii
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/6/6143/tde-16012021-200255/

Resumo - O reuso de água contribui nos âmbitos ambientais, sociais e econômicos. Entretanto a presença de parasitos em amostras hídricas tem sido evidenciada por diferentes estudos, entre eles Toxoplasma gondii. A ausência de uma metodologia padronizada para detecção de oocistos em amostras hídricas, dificulta a caracterização das mesmas, comprometendo a elaboração de uma legislação. Tendo em vista a importância do reuso da água na mitigação da escassez, do stress hídrico e diante dos desafios expostos é que o presente trabalho se insere. Objetivos - Propor técnica de concentração e recuperação de oocistos em água de reuso; propor método de extração de DNA; detectar e quantificar oocistos por qPCR. Método - Utilizando o método 1693/2014 USEPA, foram concentrados 30 L de água de reuso de 20 amostras provenientes de duas ETE\'s da cidade de São Paulo, Brasil. Os 15 mL resultantes desse processo foram concentrados em membrana 0,45µm. O material filtrado na membrana foi recuperado por raspagem com alça bacteriológica de 10 µL. Para extração de DNA foram empregadas duas técnicas: o kit comercial DNeasy PowerSoil Kit® otimizado com a enzima Zymolyase® e choque térmico. A quantificação de DNA foi realizada com a sequência alvo B1. Resultados - Na extração por choque-térmico não foi detectado DNA nas vintes amostras realizadas. Das 16 amostras submetidas à extração enzimática, quatro foram consideradas positivas. Discussão - A extração de DNA consistiu na etapa essencial para detecção e quantificação de oocisto, dado a natureza resistente das paredes. Conclusão - O reuso de água pode ser comprometido na ausência de um protocolo padronizado de detecção e quantificação de oocisto de T. gondii, que possibilite a determinação de parâmetros parasitológicos para elaboração de uma legislação.