Ação da melatonina sobre as células da granulosa de mulheres com infertilidade por fator feminino e masculino submetidas a fertilização in vitro

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Cavalcanti, Giovanna Santos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Angiogênese; Angiogenesis; Cell proliferation; Expressão gênica e Proliferação celular; Gene expression; Infertilidade; Infertility; Melatonin; Melatonina
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5139/tde-23092025-153012/

A melatonina, hormônio responsável por carrear as informações fotoperiódicas ao organismo, transmite dados sobre as variações na intensidade de luz que ocorre durante os dias e as noites ao longo do ano, sendo regulado pelo núcleo supraquiasmático do hipotálamo. Permite ao organismo responder com mudanças adaptativas às alterações do meio ambiente. Em humanos, investigadores relataram que a concentração de melatonina durante o período periovulatório está aproximadamente três vezes aumentada no líquido folicular do que a na circulação sanguínea, o que sugere a influência deste hormônio na maturação folicular. Além disso, estudos apontam que as células da granulosa expressam receptores de melatonina do tipo I e II e sua ação pode modificar conforme os níveis de estrogênio, podendo ter ação estimulatória ou inibidora sobre o AMP cíclico, modulando o metabolismo intracelular das células da granulosa, o que impacta na quantidade e na qualidade destas células. Sabe-se ainda que estas células têm grande influência no desenvolvimento oocitário. Contudo, pouco se sabe sobre sua ação sobre as células da granulosa em mulheres com infertilidade, principalmente os mecanismos moleculares envolvidos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar as vias de ação da melatonina em duas concentrações de melatonina sobre as células da granulosa dos ovários de mulheres com infertilidade grupo fator feminina (GFF) e mulheres com infertilidade grupo fator masculino (GFM) por estudos de biologia molecular, envolvendo diversas vias de sinalização como da angiogênese, comparando as mulheres com infertilidade fator feminino com a fator masculino. Para isso, foi estabelecido cultura primária de células da granulosa, obtidas a partir de fertilização in vitro, após estimulação ovariana no Centro de Reprodução Humana Governador Mário Covas do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo e Clínica Gera. A verificação da expressão da aromatase (Cyp19) e dos receptores de melatonina (MT1 e MT2) foi realizada por imunofluorescência nas células da granulosa. As células foram cultivadas em dosagens de melatonina em 0,1M e 10M, sendo que em todos os ensaios foi comparado com o controle (sem o fármaco). A reação de PCR em tempo real foi realizada para a análise da expressão de 84 genes envolvidos na angiogênese. Foram analisados após dados clínicos como idade, IMC, número de oócitos coletados, quantidade de oócitos maduros, oócitos imaturos e quantos fertilizaram em cada grupo. Os resultados foram tabulados no software GraphPad Prism 5.0. Resultados: Verificamos que as células da granulosa em ambos os grupos (GFF e GFM), apresentaram a expressão da aromatase e dos receptores de melatonina MT1 e MT2. A maior proliferação em ambos os grupos e em ambas as concentrações de melatonina (0,1M e 10M) ocorreu em 72 horas. Dentre os 84 genes analisados, três destacaram-se por apresentar diferença significativas de expressões. Quando comparado as concentrações de melatonina no GFM a concentração de 10 M apresentou maior expressão quando comparada a de 0,1M no gene VEGFB (p=0.031). A expressão do RNA mensageiro do gene PDGFA no GFF não apresentou diferença de expressão conforme nosso cut-off na concentração de 10M, mas quando comparada ao GFM na mesma concentração apresentou hipoexpressão (p=0.033). O HGF apresentou uma hiperexpressão na concentração de 10M no GFF mas na mesma concentração apresentou hipoexpresso no GFM (p=0.016). Conclusão: Os resultados sugerem que a melatonina age diferente sobre as expressões de RNA mensageiros (VEGFB, PDFA e HGF) relacionadas com a angiogênese entre as causas de infertilidade de mulheres submetidas a fertilização assistida e as concentrações de melatonina empregadas em cultivo celular de células da granulosa