Expressão de genes da via MEP/DOXP de Leifsonia xyli subsp. xyli e sua relação com a produção de carotenóides e síntese de um composto inibidor do movimento estomatal

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2022
Autor(a) principal: Faria, Raphael Severo da Cunha Antunes de
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11151/tde-11052022-181420/
Resumo: A cana-de-açúcar é cultivada globalmente, mas 30% de sua produção se concentra nas américas sendo o Brasil o maior produtor mundial. Nesta cultura existem diversos patógenos que são capazes de minar sua produção e dentre elas destaca-se o raquitismo-da-soqueira causado pela bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx). A doença possui sintomas característicos como o encurtamento dos entrenós e a redução no diâmetro e comprimento dos colmos, porém não são específicos da doença podendo ser confundidos com outras doenças ou ainda com sintomas de seca. Desde o sequenciamento do seu genoma aventa-se a possibilidade da bactéria secretar um composto análogo ao ácido abscísico onde então já foi relatado alguns efeitos tóxicos dos extratos de Lxx a sementes de alface. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram analisar a expressão in vitro dos genes da rota MEP/DOXP de Lxx, dos genes do operon carotenóide e do gene desA, analisar a presença de pigmentos carotenóides por absorbância e analisar os efeitos do extrato de Lxx no fechamento estomático de mutantes para ácido abscísico de Micro-tom (MT) na presença de polietilenoglicol 6000 (PEG6000), fosmidomicina e em ambos juntos. A expressão gênica mostrou que o PEG6000 eleva a expressão de todos os genes quando comparado ao controle enquanto que a adição de fosmidomicina inibe a expressão de quase todos os genes, com exceção do gene dxs e desA. O tratamento com ambos os compostos resultou numa expressão mais elevada que o controle, porém com menor grau que somente com PEG6000. A análise da presença de pigmentos carotenóides por absorbância mostrou um pico elevado e claro na faixa de 400nm no tratamento controle o um pico claro, mas não muito grande no tratamento com PEG6000 e fosmidomicina. Nos tratamentos com PEG6000 e fosmidomicina isoladamente não foi possível identificar um pico característico. Os extratos aplicados nos mutantes de MT tiveram resultados semelhantes mostrando um maior fechamento no extrato com tratamento de PEG6000 e um menor fechamento com fosmidomicina. Os extratos dos tratamentos controle e com adição simultânea de PEG6000 e fosmidomicina tiveram valores similares. Estes resultados corroboram para a hipótese da predição genômica de que Lxx produz um composto tóxico análogo ao ácido abscísico, mostrando a relação genética com efeitos fisiológicos e auxilia no avanço da compreensão dos sintomas causados por Lxx.
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A doença possui sintomas característicos como o encurtamento dos entrenós e a redução no diâmetro e comprimento dos colmos, porém não são específicos da doença podendo ser confundidos com outras doenças ou ainda com sintomas de seca. Desde o sequenciamento do seu genoma aventa-se a possibilidade da bactéria secretar um composto análogo ao ácido abscísico onde então já foi relatado alguns efeitos tóxicos dos extratos de Lxx a sementes de alface. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram analisar a expressão in vitro dos genes da rota MEP/DOXP de Lxx, dos genes do operon carotenóide e do gene desA, analisar a presença de pigmentos carotenóides por absorbância e analisar os efeitos do extrato de Lxx no fechamento estomático de mutantes para ácido abscísico de Micro-tom (MT) na presença de polietilenoglicol 6000 (PEG6000), fosmidomicina e em ambos juntos. A expressão gênica mostrou que o PEG6000 eleva a expressão de todos os genes quando comparado ao controle enquanto que a adição de fosmidomicina inibe a expressão de quase todos os genes, com exceção do gene dxs e desA. O tratamento com ambos os compostos resultou numa expressão mais elevada que o controle, porém com menor grau que somente com PEG6000. A análise da presença de pigmentos carotenóides por absorbância mostrou um pico elevado e claro na faixa de 400nm no tratamento controle o um pico claro, mas não muito grande no tratamento com PEG6000 e fosmidomicina. Nos tratamentos com PEG6000 e fosmidomicina isoladamente não foi possível identificar um pico característico. Os extratos aplicados nos mutantes de MT tiveram resultados semelhantes mostrando um maior fechamento no extrato com tratamento de PEG6000 e um menor fechamento com fosmidomicina. Os extratos dos tratamentos controle e com adição simultânea de PEG6000 e fosmidomicina tiveram valores similares. Estes resultados corroboram para a hipótese da predição genômica de que Lxx produz um composto tóxico análogo ao ácido abscísico, mostrando a relação genética com efeitos fisiológicos e auxilia no avanço da compreensão dos sintomas causados por Lxx.Sugarcane is grown globally, but 30% of its production is concentrated in the Americas, Brazil being the largest producer in the world. In this culture there are several pathogens that are capable of undermining its production and among them stands out the ratoon rickets caused by the bacterium Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx). The disease has characteristic symptoms such as the shortening of the internodes and reduction in the diameter and length of the stalks, but they are not specific to the disease and can be confused with other diseases or even with symptoms of drought. Since the genomes sequencing, the possibility of the bacterium secreting a compound analogous to abscisic acid has been suggested, where some toxic effects of Lxx extracts on lettuce seeds have already been reported. In this context, the objectives of this work were to analyze the in vitro expression of Lxx MEP/DOXP route genes, carotenoid operon genes and desA gene, analyze the presence of carotenoid pigments by absorbance and analyze the effects of Lxx extract on stomatal closure of Micro-tom (MT) abscisic acid mutants in the presence of polyethylene glycol 6000 (PEG6000), fosmidomycin and in both together. Gene expression showed that PEG6000 increased the expression of all genes when compared to the control, whereas the addition of fosmidomycin inhibited the expression of almost all genes, with the exception of the dxs and desA gene. Treatment with both compounds resulted in a higher expression than the control, but to a lesser degree than with PEG6000 alone. Analysis of the presence of carotenoid pigments by absorbance showed a high and clear peak in the 400nm range in the control treatment or a clear peak, but not very large in the treatment with PEG6000 and fosmidomycin. In treatments with PEG6000 and fosmidomycin alone, it was not possible to identify a characteristic peak. The extracts applied to the MT mutants had similar results showing a greater closure in the extract with PEG6000 treatment and a smaller closure with fosmidomycin. The extracts from the control treatments and with simultaneous addition of PEG6000 and fosmidomycin had similar values. These results support the genomic prediction hypothesis that Lxx produces a toxic compound analogous to abscisic acid, showing the genetic relationship with physiological effects and helping to advance the understanding of symptoms caused by Lxx.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPCamargo, Luis Eduardo AranhaFaria, Raphael Severo da Cunha Antunes de2022-02-24info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11151/tde-11052022-181420/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2022-05-16T15:18:53Zoai:teses.usp.br:tde-11052022-181420Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212022-05-16T15:18:53Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
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