Estudos in vitro enantiosseletivos do fungicida tebuconazol utilizando modelo humano: metabolismo, inibição enzimática e fenotipagem

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Habenschus, Maísa Daniela
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Cinética enzimática; Enantioselective; Enantiosseletivo; Enzyme inhibition; Enzyme kinetics; In vitro metabolism; Inibição enzimática; Metabolismo in vitro; Microsome; Microssomas; Parâmetros toxicocinéticos; Pesticide; Praguicida; Tebuconazol; Tebuconazole; Toxicokinetic parameters
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-06082021-102224/

As pessoas estão constantemente expostas a resíduos de praguicidas, seja de maneira indireta, através do consumo de água e alimentos contaminados, seja de maneira direta, como a exposição de trabalhadores rurais que aplicam praguicidas nas lavouras. Além da preocupação com a exposição do homem à esses compostos, outra questão importante diz repeito aos riscos que os praguicidas quirais representam para a saúde humana. Enantiômeros de praguicidas quirais podem diferir quanto a absorção, distribuição, metabolismo e excreção, além da toxicidade e bioacumulação em organismos não-alvo. O tebuconazol (TEB), composto em estudo neste trabalho, é um praguicida quiral da classe dos triazóis. Ele é empregado na forma de mistura racêmica para o controle do crescimento de fungos e como conservante de madeira. Estudos enantiosseletivos do TEB indicam que seus enantiômeros apresentam diferenças de atividade biológica e toxicidade para organismos aquáticos não-alvo e, portanto, o metabolismo e a toxicidade para o homem também podem ser enantiosseletivos e devem ser estudados. Baseando-se nisso, o presente trabalho propôs avaliar, de maneira enantiosseletiva, o metabolismo in vitro de fase I do TEB utilizando modelo humano, bem como o potencial inibitório deste composto frente as principais enzimas do citocromo P450 (CYP450) a fim de verificar o risco de possíveis interações praguicida-fármacos. Para isso, um método analítico enantiosseletivo por cromatografia líquida de alta eficiência foi desenvolvido e validado, permitindo a análise simultânea dos enantiômeros do TEB e do seu principal metabólito, 1- hidroxitebuconazol (TEBOH). Importantes parâmetros metabólicos in vitro foram obtidos e extrapolações in vitro-in vivo foram realizadas para calcular alguns parâmetros toxicocinéticos. Os resultados mostraram que as enzimas do CYP450 presentes nos microssomas hepáticos de humanos são capazes de metabolizar o TEB em TEBOH e perfis cinéticos de Michaelis-Menten e perfis bifásicos atípicos foram observados. Ademais, pode ocorrer metabolismo preferencial do S-(+)-TEB comparado ao rac-TEB e R-(-)-TEB, com formação preferêncial do S-(+)- TEBOH. Os estudos de fenotipagem revelaram que múltiplas isoformas do CYP450 estão envolvidas no metabolismo do TEB em TEBOH, com destaque para a CYP3A4 e CYP2C9. Os estudos de inibição enzimática mostraram que o TEB pode inibir as enzimas CYP3A4/5, CYP2C9, CYP2C19 e CYP2D6. Os mecanismos e constantes de inibição foram determinados apenas para o rac-TEB, que mostrou ser um inibidor misto forte da CYP3A4/5 e CYP2C9 e um inibidor competitivo moderado e forte da CYP2D6 e CYP2C19, respectivamente. Além disso, os valores das constantes de inibição indicaram que o risco de interações rac-TEB-fármacos não pode ser ignorado, principalmente interações com fármacos metabolizados majoritariamente pela CYP3A4/5, CYP2C9 e CYP2C19. Dessa forma, esses resultados juntos contribuem para a avaliação do risco de exposição humana ao praguicida quiral TEB e esse risco não deve ser negligenciado.