<b>Estudo da utilização de fotossensibilizadores porfirínicos na terapia fotodinâmica de patógenos isolados de mastite bovina.</b>
| Ano de defesa: | 2025 |
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| Tipo de documento: | Tese |
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Biblioteca Digitais de Teses e Dissertacoes da USP
Universidade de São Paulo Biotecnologia |
| Programa de Pós-Graduação: |
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| Palavras-chave em Português: | |
| Link de acesso: | https://teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-30042026-143354/ |
Resumo: | Neste trabalho foi investigada a ação fotodinâmica em processos de Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (APDT) de fotossensibilizadores (PS) catiônicos porfirínicos na fotoinativação de bactérias Gram-positivas (<em>S. aureus</em>) e Gram negativas (<em>E. coli</em> e <em>P. aeruginosa</em>) e de uma microalga (<em>P. zopfii</em>); sendo estes patógenos isolados de processos infecciosos encontrados na mastite bovina. Foram utilizados PS da base livre meso-tetra-(metil-piridínio)-porfirina (TMPyP <b>P1</b>) e o respectivo complexo de zinco(II) (ZnTMPyP <b>ZnP1</b>), e o comportamento destes PS comparado com o da base livre meso-tetra-(benzil-piridínio)-porfirina (TBzPyP <b>P2</b>) e seu respectivo complexo de zinco(II) (ZnTBzPyP <b>ZnP2</b>). Em suspensão de PBS, P2 e particularmente ZnP2 são os PS mais eficientes na fotoinativação total de todos os microrganismos isolados de mastite bovina investigados no presente estudo. A maior eficiência é atribuída principalmente a maior incorporação e/ou interação com os microrganismos como consequência da estrutura destes ligantes que além de serem tetra-catiônicos possuem em sua estrutura substituintes alquílicos que conferem maior grau de hidrofobicidade a esses PS comparativamente a P1 e ZnP1 que também são tetra-catiônicos, porém apresentam substituintes alquílicos com pequena contribuição hidrofóbica. Portanto, o balanço polar (hidrofílico) apolar (hidrofóbico) gerado respectivamente pelas cargas positivas e pelos substituintes benzílicos, mostra-se mais adequada na interação com os microrganismos. Para avaliar o efeito fotodinâmico na presença de leite os experimentos de fotoinativação foram conduzidos diretamente em placas de ágar de forma a eliminar o efeito de opacidade do meio (leite) uma vez que se obtém apenas uma fina película de amostra aplicada na placa. Como controle foi investigada o comportamento do sistema utilizando apenas PBS para aplicação dos microrganismos nas placas (ÁgarPBS) e depois efetivamente realizados os experimentos com aplicação dos microrganismos em leite (ÁgarLeite). Os resultados em placa de ÁgarPBS mostram as mesmas tendências dos experimentos em suspensão de PBS, ou seja, P2 e ZnP2 mostram-se mais efetivos que P1 e ZnP1, entretanto são necessárias maiores concentrações para que seja observado o efeito fotodinâmico para todos os PS em todos os microrganismos investigados. Em placas de ÁgarLeite, P1 e ZnP1 são mais efetivos que P2 e ZnP2 e a condição para fotoinativação que leva à <em>ausência de viabilidade</em> é idêntica a observada nas placas ÁgarPBS. P2 e ZnP2 precisam de concentrações relativamente maiores para produzir os efeitos fotodinâmicos. Este comportamento diferenciado em placas de ÁgarLeite são claros indicativos que P1 e ZnP1 compostos mais hidrofílicos, não são afetados pelas proteínas e gorduras do leite, enquanto P2 e ZnP2 apresentam uma interação muito forte com os componentes apolares do leite minimizando assim a sua interação com os microrganismos na placa. ZnP1 é muito mais efetivo que P1, o que pode estar relacionado com o seu rendimento quântico de formação de oxigênio singlete que é o maior da série investigada. Portanto, o entendimento da atividade dos PS em função de sua estrutura correlacionando com as propriedades do meio são extremamente importantes na elaboração de estratégias para utilização da APDT em problemas específicos em que ocorrem infecções. |
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<b>Estudo da utilização de fotossensibilizadores porfirínicos na terapia fotodinâmica de patógenos isolados de mastite bovina.</b><b>Study of the use of porphyrin photosensitizers in the photodynamic therapy of pathogens isolated from bovine mastitis.</b>Fotossensibilizadores MetaloporfirinasMastite BovinaMétodos Alternativos ao Uso de AntibióticosTerapia Fotodinâmica Antimicrobiana (APDT)Alternative Methods to the Use of AntibioticsAntimicrobial Photodynamic Therapy (APDT)Bovine MastitisCationic PhotosensitizersPorphyrins and MetalloporphyrinsNeste trabalho foi investigada a ação fotodinâmica em processos de Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (APDT) de fotossensibilizadores (PS) catiônicos porfirínicos na fotoinativação de bactérias Gram-positivas (<em>S. aureus</em>) e Gram negativas (<em>E. coli</em> e <em>P. aeruginosa</em>) e de uma microalga (<em>P. zopfii</em>); sendo estes patógenos isolados de processos infecciosos encontrados na mastite bovina. Foram utilizados PS da base livre meso-tetra-(metil-piridínio)-porfirina (TMPyP <b>P1</b>) e o respectivo complexo de zinco(II) (ZnTMPyP <b>ZnP1</b>), e o comportamento destes PS comparado com o da base livre meso-tetra-(benzil-piridínio)-porfirina (TBzPyP <b>P2</b>) e seu respectivo complexo de zinco(II) (ZnTBzPyP <b>ZnP2</b>). Em suspensão de PBS, P2 e particularmente ZnP2 são os PS mais eficientes na fotoinativação total de todos os microrganismos isolados de mastite bovina investigados no presente estudo. A maior eficiência é atribuída principalmente a maior incorporação e/ou interação com os microrganismos como consequência da estrutura destes ligantes que além de serem tetra-catiônicos possuem em sua estrutura substituintes alquílicos que conferem maior grau de hidrofobicidade a esses PS comparativamente a P1 e ZnP1 que também são tetra-catiônicos, porém apresentam substituintes alquílicos com pequena contribuição hidrofóbica. Portanto, o balanço polar (hidrofílico) apolar (hidrofóbico) gerado respectivamente pelas cargas positivas e pelos substituintes benzílicos, mostra-se mais adequada na interação com os microrganismos. Para avaliar o efeito fotodinâmico na presença de leite os experimentos de fotoinativação foram conduzidos diretamente em placas de ágar de forma a eliminar o efeito de opacidade do meio (leite) uma vez que se obtém apenas uma fina película de amostra aplicada na placa. Como controle foi investigada o comportamento do sistema utilizando apenas PBS para aplicação dos microrganismos nas placas (ÁgarPBS) e depois efetivamente realizados os experimentos com aplicação dos microrganismos em leite (ÁgarLeite). Os resultados em placa de ÁgarPBS mostram as mesmas tendências dos experimentos em suspensão de PBS, ou seja, P2 e ZnP2 mostram-se mais efetivos que P1 e ZnP1, entretanto são necessárias maiores concentrações para que seja observado o efeito fotodinâmico para todos os PS em todos os microrganismos investigados. Em placas de ÁgarLeite, P1 e ZnP1 são mais efetivos que P2 e ZnP2 e a condição para fotoinativação que leva à <em>ausência de viabilidade</em> é idêntica a observada nas placas ÁgarPBS. P2 e ZnP2 precisam de concentrações relativamente maiores para produzir os efeitos fotodinâmicos. Este comportamento diferenciado em placas de ÁgarLeite são claros indicativos que P1 e ZnP1 compostos mais hidrofílicos, não são afetados pelas proteínas e gorduras do leite, enquanto P2 e ZnP2 apresentam uma interação muito forte com os componentes apolares do leite minimizando assim a sua interação com os microrganismos na placa. ZnP1 é muito mais efetivo que P1, o que pode estar relacionado com o seu rendimento quântico de formação de oxigênio singlete que é o maior da série investigada. Portanto, o entendimento da atividade dos PS em função de sua estrutura correlacionando com as propriedades do meio são extremamente importantes na elaboração de estratégias para utilização da APDT em problemas específicos em que ocorrem infecções.In this work, the photodynamic action in Antimicrobial Photodynamic Therapy (APDT) processes of cationic porphyrin photosensitizers (PS) in the photoinactivation of Gram-positive (<em>S. aureus</em>) and Gram-negative (<em>E. coli</em> and <em>P. aeruginosa</em>) bacteria and the microalgae (<em>P. zopfii</em>) was investigated; these pathogens being isolated from infectious processes of bovine mastitis. PS of the free base meso-tetra-(methyl pyridinium)-porphyrin (TMPyP - <b>P1</b>) and the respective zinc (II) complex (ZnTMPyP - <b>ZnP1</b>) were used, and the behavior of these PS compared with that of the free base meso-tetra-(benzyl-pyridinium)-porphyrin (TBzPyP- <b>P2</b>) and its respective zinc(II) complex (ZnTBzPyP - <b>ZnP2</b>). In PBS-suspension, P2 and particularly ZnP2 are the most efficient PS in the total photoinactivation of all microorganisms isolated from bovine mastitis investigated in the present study. The greater efficiency of P2 and ZnP2 is attributed mainly to the greater incorporation and/or interaction with the microorganisms because of their particular structure, which in addition to being tetra cationic, have alkyl substituents that confer a greater degree of hydrophobicity to these PS compared to P1 and ZnP1, which are also tetra-cationic, but have alkyl substituents with a small hydrophobic contribution. Therefore, the polar (hydrophilic) apolar (hydrophobic) balance generated respectively by the positive charges and by the benzyl substituents, is more adequate in the interaction with the microorganisms. To evaluate the photodynamic effect in the presence of milk, photoinactivation experiments were conducted directly on agar plates to eliminate the opacity effect of the medium (milk), since only a thin film of sample applied to the plate is obtained. As a control, the behavior of the system was investigated using only PBS to apply the microorganisms to the plates (Agar-PBS) and then the experiments were effectively carried out with the application of the microorganisms in milk (Agar-Milk). The results on the Agar-PBS plate show the same trends as the experiments in PBS suspension, that is, P2 and ZnP2 are more effective than P1 and ZnP1, however, higher concentrations are required to observe the photodynamic effect for all PS in all microorganisms investigated. On Agar-Milk plates, P1 and ZnP1 are more effective than P2 and ZnP2 and the condition for photoinactivation that leads to the absence of viability is identical to that observed on the Agar-PBS plates. P2 and ZnP2 require relatively higher concentrations to produce photodynamic effects. This differentiated behavior on AgarMilk plates is a clear indication that P1 and ZnP1, more hydrophilic compounds, are not affected by milk proteins and fats, while P2 and ZnP2 have a very strong interaction with the nonpolar components of milk, thus minimizing their interaction with microorganisms on the plate. ZnP1 is much more effective than P1, which may be related to its quantum yield of singlet oxygen formation, which is the highest of the series investigated. Therefore, understanding the activity of PS based on its structure and correlating it with the properties of the medium is extremely important in developing strategies for using APDT in specific problems in which infections occur.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertacoes da USPUniversidade de São PauloBiotecnologiaGidlund, Magnus AkeChipana, Melissa Mercedes Torres2025-03-272026-05-04info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-30042026-143354/doi:10.11606/T.87.2025.tde-30042026-143354Liberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USP2026-05-04T17:47:03Zoai:teses.usp.br:tde-30042026-143354Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212026-05-04T17:47:03Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false |
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<b>Estudo da utilização de fotossensibilizadores porfirínicos na terapia fotodinâmica de patógenos isolados de mastite bovina.</b> Chipana, Melissa Mercedes Torres Fotossensibilizadores Metaloporfirinas Mastite Bovina Métodos Alternativos ao Uso de Antibióticos Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (APDT) Alternative Methods to the Use of Antibiotics Antimicrobial Photodynamic Therapy (APDT) Bovine Mastitis Cationic Photosensitizers Porphyrins and Metalloporphyrins |
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Neste trabalho foi investigada a ação fotodinâmica em processos de Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (APDT) de fotossensibilizadores (PS) catiônicos porfirínicos na fotoinativação de bactérias Gram-positivas (<em>S. aureus</em>) e Gram negativas (<em>E. coli</em> e <em>P. aeruginosa</em>) e de uma microalga (<em>P. zopfii</em>); sendo estes patógenos isolados de processos infecciosos encontrados na mastite bovina. Foram utilizados PS da base livre meso-tetra-(metil-piridínio)-porfirina (TMPyP <b>P1</b>) e o respectivo complexo de zinco(II) (ZnTMPyP <b>ZnP1</b>), e o comportamento destes PS comparado com o da base livre meso-tetra-(benzil-piridínio)-porfirina (TBzPyP <b>P2</b>) e seu respectivo complexo de zinco(II) (ZnTBzPyP <b>ZnP2</b>). Em suspensão de PBS, P2 e particularmente ZnP2 são os PS mais eficientes na fotoinativação total de todos os microrganismos isolados de mastite bovina investigados no presente estudo. A maior eficiência é atribuída principalmente a maior incorporação e/ou interação com os microrganismos como consequência da estrutura destes ligantes que além de serem tetra-catiônicos possuem em sua estrutura substituintes alquílicos que conferem maior grau de hidrofobicidade a esses PS comparativamente a P1 e ZnP1 que também são tetra-catiônicos, porém apresentam substituintes alquílicos com pequena contribuição hidrofóbica. Portanto, o balanço polar (hidrofílico) apolar (hidrofóbico) gerado respectivamente pelas cargas positivas e pelos substituintes benzílicos, mostra-se mais adequada na interação com os microrganismos. Para avaliar o efeito fotodinâmico na presença de leite os experimentos de fotoinativação foram conduzidos diretamente em placas de ágar de forma a eliminar o efeito de opacidade do meio (leite) uma vez que se obtém apenas uma fina película de amostra aplicada na placa. Como controle foi investigada o comportamento do sistema utilizando apenas PBS para aplicação dos microrganismos nas placas (ÁgarPBS) e depois efetivamente realizados os experimentos com aplicação dos microrganismos em leite (ÁgarLeite). Os resultados em placa de ÁgarPBS mostram as mesmas tendências dos experimentos em suspensão de PBS, ou seja, P2 e ZnP2 mostram-se mais efetivos que P1 e ZnP1, entretanto são necessárias maiores concentrações para que seja observado o efeito fotodinâmico para todos os PS em todos os microrganismos investigados. Em placas de ÁgarLeite, P1 e ZnP1 são mais efetivos que P2 e ZnP2 e a condição para fotoinativação que leva à <em>ausência de viabilidade</em> é idêntica a observada nas placas ÁgarPBS. P2 e ZnP2 precisam de concentrações relativamente maiores para produzir os efeitos fotodinâmicos. Este comportamento diferenciado em placas de ÁgarLeite são claros indicativos que P1 e ZnP1 compostos mais hidrofílicos, não são afetados pelas proteínas e gorduras do leite, enquanto P2 e ZnP2 apresentam uma interação muito forte com os componentes apolares do leite minimizando assim a sua interação com os microrganismos na placa. ZnP1 é muito mais efetivo que P1, o que pode estar relacionado com o seu rendimento quântico de formação de oxigênio singlete que é o maior da série investigada. Portanto, o entendimento da atividade dos PS em função de sua estrutura correlacionando com as propriedades do meio são extremamente importantes na elaboração de estratégias para utilização da APDT em problemas específicos em que ocorrem infecções. |
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