Estudos estruturais da endopeptidase glutamato-específica de Bacillus licheniformis

• Ano de defesa: 1998
• Autor(a) principal: Cardoso, Rosa Maria Fernandes
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Bacillus licheniformis; cristalografia de raios-x; endopeptidase glutamato-específica; glutamate-specific endopeptidase; serine-proteases; serino-proteases; x-ray crystallography
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75131/tde-10122025-161628/

A endopeptidase glutamato-específica de Bacillus licheniformis (GSE-Bl) pertence à família das serino-proteases tipo tripsina e catalisa seletivamente a hidrólise de ligações peptídicas, no lado C-terminal dos resíduos de glutamato. O objetivo final deste projeto é compreender melhor a base estrutural da especificidade das endopeptidases para glutamato. A GSE-Bl foi purificada por meio de uma variação no procedimento de Svendsen e Breddam\'. Análises das amostras da GSE-BI por SDS-PAGE e HPLC, sugerem a ocorrência de autólise sobre a influência do SDS e/ou do aquecimento das amostras, pelo menos até 37°C. Monocristais da GSE-BI foram obtidos pelo método de difusão de vapor com a gota suspensa, utilizando PEG 3400 à 18% em tampão acetato 0,11 M pH 4,6. O processamento dos dados de difração de raios-X revelou que GSE-Bl cristalizou no grupo espacial P21 com a = 63,42 Å, b = 79,39 Å, c = 9,16 Å e β = 90,04°. A completeza dos dados é de 89,6% com Rmerge de 9,2% até 2,3 Å de resolução. Cálculos de conteúdo de solvente sugerem a existência de quatro monômeros da GSE-BI na unidade assimétrica. Tentou-se solucionar o problema das fases com o método de substituição molecular ; todavia, sem sucesso possivelmente devido à baixa similaridade estrutural dos modelos com a GSE-Bl. Buscando obter informações a respeito do enovelamento da GSE-BI, foram realizadas medidas de dicroismo circular, em tampão Tris-Fosfato 20 mM pH 8,08 e em água, e medidas no infravermelho, com a proteina em pastilha com KBr. Os resultados puderam ser comparados com a definição de estrutura secundária, gerada a partir de um modelo estrutural teórico da GSE-BI, revelando, como esperado, um enovelamento dominado por fitas β antiparalelas.