Espectroscopia de ressonância paramagnética eletrônica com marcadores de spin aplicada ao estudo de hemácias íntegras

• Ano de defesa: 1984
• Autor(a) principal: Ruggiero, Ana Celia
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: electron paramagnetic resonance spectroscopy; espectroscopia de ressonância paramagnética eletrônica; hemácias íntegras; intact erythrocytes; marcadores de spin; spin labels
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/54/54133/tde-25092025-160939/

O eritrócito íntegro, bem como sua membrana isolada (\"ghosts\"), devido às suas propriedades estruturais e bioquímicas, tem sido utilizado como modelo para o estudo das funções e propriedades celulares. O método de marcadores de spin, recentemente, tem sido amplamente empregado para o estudo das propriedades funcionais e estruturais das hemácias íntegras e da membrana isolada. Este método consiste na introdução de um radical livre estável no sistema biológico. A análise dos espectros de ressonância paramagnética eletrônica desses marcadores de spin fornece informações sobre mudanças que ocorrem nas proximidades deste marcador. No presente trabalho, tratou-se as hemácias íntegras com uma droga de ação farmacológica de vasodilatação, a papaverina, e procurou-se obter informações acerca das alterações causadas pela droga na membrana eritrocitária através da monitoração pela espectroscopia de ressonância paramagnética eletrônica com marcadores lipídicos derivados do ácido esteárico. As alterações na membrana causadas pela papaverina, em pH igual a 7,4, não foram significativas. Hemácias deficientes em glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) possuem níveis diminuídos de glutationa reduzida. Tentou-se determinar prováveis alterações que essa deficiência poderia causar à membrana eritrocitária, marcando hemácias íntegras deficientes em G6PD também com os derivados do ácido esteárico. Os resultados obtidos mostraram ligeiras alterações que ocorrem no interior da membrana. Além disso, procurou-se neste trabalho determinar, no interior da hemácia, o local de ligação do marcador de spin NEM*, derivado da maleimida, específico para grupos tióis. Os resultados indicam que provavelmente a glutationa reduzida é o sítio de ligação preferencial do marcador maleimida. Na hemácia nativa, o tratamento da hemácia com N-etilmaleimida conduz à marcação da hemoglobina intraeritrocitária. O marcador de spin TEMPOL penetra através da membrana e, no interior da hemácia, é reduzido. Neste trabalho, procurou-se detectar o sistema responsável pela redução do marcador. Os resultados obtidos com o tratamento das hemácias para depleção de ATP, inibição da oxirredução e a utilização de hemácias deficientes em G6PD (que têm menor concentração de glutationa reduzida) não mostraram alterações nos processos de redução do marcador. Mostrou-se também que a membrana do eritrócito isolada não reduz o TEMPOL. Sugere-se que o sítio de redução pode estar ligado à endoface da membrana.