Participação da proteína dissulfeto isomerase da superfície do macrófago na fagocitose e infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis.

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Paiva, Guilherme Carrara Moreira
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: PDI; Camundongo FVB/NJ; Infecção; Leishmania (L.) amazonenses; Leishmaniose tegumentar; PDI; FVB/NJ mouse strain; Infection; Leishmania (L.) amazonensis; Tegumentary leishmaniasis
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-24032026-180149/

As leishmanioses constituem um espectro de doenças negligenciadas tropicais e subtropicais causadas por tripanossomatídeos do gênero Leishmania, e podem ser agrupadas em duas formas principais: leishmaniose tegumentar e leishmaniose visceral. A espécie Leishmania (L.) amazonensis é a segunda mais prevalente dentre as causadoras de leishmaniose tegumentar no Brasil. No ciclo de transmissão de Leishmania a mamíferos, o macrófago é a principal célula hospedeira do parasito. Muitos estudos têm mostrado proteínas da superfície da célula hospedeira com participação direta na fagocitose de Leishmania. Neste trabalho, avaliamos o papel da proteína dissulfeto isomerase (PDI) da superfície do macrófago na fagocitose e infecção por L. (L.) amazonensis. A PDI é uma das chaperonas mais abundantes no retículo endoplasmático (RE) e pode também ser encontrada em outros compartimentos subcelulares, entre eles a membrana plasmática. A PDI exerce papel canônico nas sinalizações redox e na isomerização de ligações dissulfeto de proteínas nascentes do RE, além de desempenhar a função de chaperona auxiliando no transporte de proteínas. Um estudo na literatura associou a presença de PDI na superfície do macrófago ao aumento da fagocitose por Leishmania infantum chagasi, uma espécie associada à leishmaniose visceral. Neste trabalho, nós utilizamos macrófagos de camundongos transgênicos da linhagem FVB/NJ superexpressores de PDI (TgPDIA1) para os experimentos de adesão, fagocitose e de infecção por L. (L.) amazonensis in vitro e in vivo. Validamos a presença de PDI na superfície por citometria de fluxo e demonstramos que a infecção de macrófagos pré-tratados com anti-PDI foi menor em comparação com o controle. Mostramos que a proteína aumenta a adesão, fagocitose e infecção em macrófagos TgPDIA1 em comparação aos selvagens. Avaliamos que o aumento da capacidade fagocítica dos macrófagos TgPDIA1 é independente da presença de Leishmania, visto que a fagocitose de partículas de zimosan foi maior em comparação com a dos macrófagos selvagens. Caracterizamos a presença de PDI em RE, membrana plasmática (MP) e vacúolo parasitóforo (VP) em macrófagos infectados e não infectados com L. (L.) amazonensis, bem como a presença de PDI em vesículas extracelulares liberadas por macrófagos infectados e não infectados. Observamos que a PDI está presente nesses três compartimentos subcelulares e que aparentemente não é translocada para as vesículas. Nos experimentos in vivo, usando o modelo de infecção M2269 La-LUC em camundongos FVB/NJ selvagem e TgPDIA1, mostramos que a superexpressão de PDI tende a aumentar o inchaço de lesões nas patas e a carga parasitária em comparação aos animais selvagens. Visto que o camundongo superexpressor de PDI foi obtido em background FVB/NJ, paralelamente ao estudo de PDI caracterizamos o camundongo FVB/NJ como modelo de infecção por L. (L.) amazonensis .