Desempenho de discos de poli ?-caprolactona/poli (rotaxano) funcionalizados por células tronco de polpa dentária humana na angiogênese: ensaio em membrana corioalantóica

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Oliveira, Natacha Kalline de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Angiogenesis Effect; Células tronco; Chorioallantoic Membran; Efeito angiogênico; Membrana corioalantóica; Polímeros; Polymers; Stem cells
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/23/23149/tde-27082021-151611/

As terapias regenerativas abrem grandes possibilidades para as grandes reconstruções ósseas. A engenharia de biomateriais tem um papel importante nesse cenário, mais precisamente com o desenvolvimento de estruturas que forneçam um ambiente favorável para a proliferação e diferenciação de células residentes ou implantadas na região receptora para a neoformação óssea. Há seis anos trabalhamos em parceria com o Departamento de Materiais da Faculdade de Engenharia Mecânica da UNICAMP para a caracterização biológica de um biomaterial composto por uma blenda polimérica de poli ?-caprolactona/poli (rotaxano), que apresentou potencial para ser funcionalizada por células tronco de polpa dentária humana com diferenciação osteogênica. O sucesso da bioengenharia de substitutos de novos tecidos depende de rápida e adequada angiogênese para que ocorra suprimento de oxigênio e de nutrientes para a sobrevida das células. O objetivo deste estudo foi verificar o desempenho de discos de blenda polimérica de poli ?-caprolactona/poli (rotaxano) funcionalizados por células tronco de polpa dentária humana no processo de vascularização por meio de um ensaio em membrana corioalantóica. Células tronco de polpa dentária humana (hDPSCs) foram cultivadas por 14 dias a partir de amostras congeladas e re-caracterizadas. Para este ensaio, utilizamos ovos de galinha fertilizados no 3º dia embrionário. Foram removidos 2mL de albumina e a confeccionada abertura nas cascas de todos os ovos. No 7º dia embrionário sobre a membrana corioalantóica (MCA) dos ovos que apresentavam sinal visível de fecundação e embrião viável, foram depositados os insertos do experimento distribuídos nos grupos: Policlono, onde as células cultivadas em meio clonogênico por 14 dias foram semeadas sobre discos do polímero; Polimin, onde as células semeadas foram cultivadas em meio mineralizante por 14 dias; Poli no qual foi inserido apenas o disco de polímero sem semeadura celular; controle positivo apenas com inserto de hDPSCs na mesma densidade das semeaduras anteriores e controle negativo sem células e sem biomaterial para normatizar o padrão vascular sem intervenções. No 14º dia embrionário as aberturas nas cascas foram ampliadas e foram realizadas imagens digitais padronizadas para avaliação macroscópica da vascularização. As MCAs de todos os ovos foram removidas para análise histológica por meio de coloração por Hematoxilina-Eosina para avaliação microscópica da angiogênese. Colorações imuno-histoquímicas para anticorpos CD34 e Actina músculo liso (AML) e de imunofluorescência para Lamin-A foram utilizadas de foram representativas da presença das células endoteliais, dos vasos sanguíneos e das hDPSCs respectivamente. Os resultados mostraram que ocorreu aumento do número de vasos e intersecções e uma correspondência histológica da angiogênese na presença do conjunto poli ?-caprolactona/poli (rotaxano)/hDPSCs. Foi possível observar ainda que as células indiferenciadas pareceram estimular a angiogênese de forma mais intensa quando comparado às células diferenciadas. A blenda de poli ?-caprolactona/poli (rotaxano) possui potencial de estimular a angiogênese especialmente quando funcionalizada por células tronco e desempenho promissor como biomaterial bioativo para bioengenharia nas terapias regenerativas.