Regulação do splicing alternativo do gene MIR17HG

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Munhoz, Vivian Maltese
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: miR-17-92; MIR17HG; Splicing; Cancer; Câncer; hnRNP
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-13102025-152114/

Em eucariotos, os genes são transcritos como pré-mRNAs, os quais são compostos por exons, sequências que serão mantidas no mRNA maduro, intercalados por sequências intermediárias denominadas introns. O splicing é um processo co-transcricional que catalisa a junção dos exons e a remoção dos introns, permitindo a formação de transcritos maduros funcionais (mRNAs). Esse processo é realizado por uma complexa maquinaria ribonucleoproteica denominada spliceossomo, a qual é composta por cinco snRNPs e mais de 100 proteínas. Além de proteínas do núcleo central do complexo, algumas podem associar-se a componentes do spliceossomo ou aos pré-mRNAs, como por exemplo, as proteínas da família das hnRNPs. Essas proteínas podem interferir na seleção dos sítios de splicing presentes em pré-mRNAs e, consequentemente, modular o processo de splicing. Algumas hnRNPs já foram associadas a transcritos contendo microRNAs (miRNAs) nos introns, sugerindo um possível envolvimento na regulação do splicing desses transcritos. Aproximadamente 70% dos miRNAs humanos possuem localização intrônica e, nesse contexto, é possível que o processo de splicing seja importante para sua biogênese. O cluster intrônico de miRNAs miR-17-92 está localizado no intron 3 do gene MIR17HG. A superexpressão do cluster foi observada em diversos tipos de câncer, incluindo carcinoma de tireoide e câncer de mama. Resultados prévios obtidos por nosso grupo de pesquisa revelaram a associação de hnRNP A1, hnRNP K e hnRNP M aos miRNAs miR-18a e miR-19a, assim como demonstraram que a hnRNP A1 é importante para a maturação desses miRNAs. A hipótese deste trabalho é de que as proteínas hnRNP A1, hnRNP K e hnRNP M regulam o splicing de MIR17HG, interferindo diretamente na síntese dos miRNAs do cluster miR-17-92 e no fenótipo celular. Neste trabalho, investigamos a regulação executada pelas proteínas hnRNP A1 e hnRNP K no splicing do gene MIR17HG, bem como na síntese dos miRNAs pertencentes ao cluster miR-17-92. Os níveis de expressão desses miRNAs foram avaliados por RT-qPCR. Em seguida, foram analisados os perfis de splicing dos genes BCL2L1 e CD44, ambos associados ao desenvolvimento tumoral, em células HEK-293T e BCPAP superexpressando hnRNP A1 e hnRNP K. Por fim, experimentos para verificar a proliferação celular foram conduzidos em células superexpressando as proteínas hnRNP A1 e hnRNP K. Em conjunto, os resultados obtidos corroboram a hipótese inicial do estudo, revelando que o aumento de hnRNP A1 e hnRNP K em linhagem HEK-293T pode modular o splicing do gene MIR17HG, promovendo o aumento da isoforma MIR17HG-203, que abriga o cluster miR-17-92. Além disso, o aumento de hnRNP A1 nessa linhagem também foi capaz de modular o splicing do gene BCL2L1, interferindo nas isoformas produzidas. Em contrapartida, a superexpressão de hnRNP A1 e hnRNP K não impactou na isoforma canônica de CD44. Finalmente, os experimentos de proliferação celular indicaram que hnRNP A1 e hnRNP K podem promover o aumento da proliferação em linhagem HEK-293T.