A pervasividade da mutação del 3554G no exon 6 (domínio SAND) do gene Aire afeta o transcriptoma de células tímicas epiteliais medulares e de timócitos CD4+ aderentes

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Machado, Mayara Cristina Vieira
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Autoimmune Regulator (Aire) gene; Células tímicas epiteliais medulares (mTECs); CRISPR-Cas9; Gene Autoimmune Regulator (Aire); Medullary thymic epithelial cells (mTECs); Single-cell RNAseq (scRNA); Thymocytes; Timócitos
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-21012025-115246/

O gene Autoimmune regulator (Aire) desempenha um papel crucial na regulação da tolerância imunológica central e na prevenção de doenças autoimunes, controlando a expressão de antígenos restritos a tecidos (TRAs) em células tímicas epiteliais medulares (mTECs) por meio da expressão gênica promíscua (PGE). A interação entre mTECs e timócitos, conhecida como crosstalk tímico, é influenciada pelo gene autoimmune regulator (Aire), e é fundamental para o desenvolvimento das células T e a indução da tolerância imunológica central. Neste estudo, investigamos o impacto do gene Aire na regulação de processos moleculares e celulares que estão na base da tolerância imunológica central, com foco na interação entre mTECs e timócitos. Para isso, utilizamos a técnica CRISPR-Cas9 para induzirmos mutações no exon 6 do gene Aire. Por meio de single-cell RNA sequencing (scRNA-seq), analisamos os genes diferencialmente expressos em mTECs Aire wild-type (WT) e Aire mutantes, assim como de timócitos CD4+ WT que aderiram a essas células. Observamos que a deficiência de Aire provoca nas mTECs diminuição da proliferação celular e redução na fase S do ciclo celular. Análises por citometria de fluxo revelaram níveis aumentados do marcador CD80 em células mTEC Aire mutantes. Além disso, a expressão do marcador de adesão EpCAM também aumentou nas células mutantes, sugerindo possível influência na interação mTEC-timócito. Observamos também alterações na morfologia das mTECs em cultura, sendo que as células mutantes exibiram desorganização. Nas análises por citometria de fluxo dos timócitos, constatamos aumento de CD28 e diminuição de CTLA-4, sugerindo falta de controle da ativação imunológica. Além disso, observamos diferença no número de timócitos CD4+ que aderem a células mTEC Aire mutantes. Isso poderá estar associado com o mecanismo de predisposição a respostas autoimunes. Esses resultados contribuem com a melhor compreensão do papel pervasivo da mutação del 3554G no gene Aire na modulação de timócitos após sua interação com mTECs mutantes.