Métodos alternativos para avaliação de endotoxinas: desafios e tendências internacionais visando à segurança de pacientes

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Hilinski, Ellen Gameiro
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: 3Rs; Alternative method; Bacterial Endotoxin; Endotoxina bacteriana; Fator C recombinante; Método alternativo; Recombinant factor C
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9139/tde-10102024-093211/

A implementação de métodos alternativos in vitro que permitam a quantificação de níveis reduzidos de endotoxinas bacterianas possui grande relevância para garantir a segurança e a qualidade de produtos farmacêuticos para uso parenteral. O trabalho teve por objetivo avaliar o desempenho de dois kits comerciais (Endozyme® II Go e EndoLISA®) que utilizam o receptor de uma endotoxina de síntese (fator C recombinante) em combinação com um substrato fluorogênico, para a determinação quantitativa de endotoxinas bacterianas em amostras de solução de Cloreto de Sódio 0,9% para uso parenteral e de soros hiperimunes (antirrábico, antibotrópico e antitetânico). As avaliações de desempenho dos métodos por fator C recombinante foram realizadas para, no mínimo, 5 níveis de concentrações, contemplando seis parâmetros farmacopeicos. Os ensaios foram conduzidos de acordo com as metodologias recomendadas pelo fabricante dos kits. Os métodos alternativos empregando os kits Endozyme® II Go e EndoLISA® atenderam aos critérios de exatidão, precisão e linearidade para as faixas de trabalho entre 0,005 e 10 UE/mL, e 0,05 UE/mL e 5 UE/mL, respectivamente. Os limites de detecção e quantificação foram definidos para a menor concentração de cada faixa. Os ensaios de robustez demonstraram que desvios nos tempos de adição do substrato enzimático e nos tempos de ligação não impactaram os resultados. Entretanto, o kit EndoLISA® não deve ser considerado como uma opção para a avaliação de soros hiperimunes nos quais são esperadas concentrações de endotoxinas superiores a 5 UE/mL. Conclui-se, portanto, que os reagentes recombinantes para a detecção de endotoxinas oferecem uma oportunidade de modernização para a área farmacêutica e podem contribuir significativamente para a conservação dos caranguejos-ferradura e a redução da utilização dos coelhos na realização de ensaios.