Avaliação do Encapsulamento da Asparaginase pela α2-Macroglobulina Humana via Ligação Tioéster: Caracterizações e implicações Bioquímicas

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Andrade, Pietro de Carvalho
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: α2-Macroglobulina humana; Biofármaco; Biopharmaceutical; Complexo protéico covalente; Covalent protein complex; Human α2-Macrolgobulin; L-asparaginase
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9134/tde-06022026-150419/

AL-Asparaginase (ASNase) desempenha papel crucial no tratamento de primeira linha da Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA). No entanto, ASNases comerciais frequentemente desencadeiam respostas imunogênicas devido a sua origem bacteriana, tornando importante o desenvolvimento de formulações com menor imunogenicidade. As α2-Macroglobulinas (α2Ms) são proteínas abundantes no plasma humano, capazes de aprisionar e inibir uma ampla gama de endopeptidases. Além disso, já foi relatada a formação de complexos entre α2Ms e proteínas não proteolíticas sem comprometer a atividade biológica do substrato aprisionado. Com base nisso, propromos a complexação das ASNases com α2-Macroglobulina humana (hα2M), visando proteger a enzima bacteriana do reconhecimento por anticorpos e proteases in vivo. Essa dissertação apresenta uma revisão sobre hα2M, que aborda sua estrutura, mecanismos e funções no sistema imune inato. O projeto experimental teve como objetivo desenvolver um complexo covalente hα2M-ASNase, comprovar sua formação e avaliar seu efeito na atividade de ASNase. Por meio de análises de eletroforese, zimografia, Western blot quimioluminescente, densitometria e ensaio de Nessler comprovamos a formação de um complexo covalente. A metodologia iniciou com a produção heteróloga de ASNase, seguida da formação do complexo com hα2M comercial (Sigma) e avaliação da atividade asparaginásica. Observou-se que a hα2M comercial apresentava formas heterogêneas de conformação quatemária, possivelmente prejudiciais ao objetivo proposto. Optou-se, então, pela purificação de hα2M do plasma humano (obtido comercialmente), e verificou-se a formação de complexo covalente com a ASNase de E. coli (EcAII) e com proteoformas glicosiladas da ASNase de D. dadantii (ErA-Glico). Apesar disso, devido à baixa taxa de incorporação e baixa atividade do complexo, essa estratégia foi descartada como candidato a biobetter de ASNase. Este trabalho demonstrou, pela primeira vez, a formação de um complexo covalente entre hα2M e uma enzima tetramérica, além de fornecer hipóteses sobre a interação dessas proteínas, com potencial relevância biológica e translacional para novos estudos.