Cito- e histopatologia comparativa de tecido foliar de orquídeas infectadas pelo orchid fleck virus

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Magalhães, Izabela Ponso
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Dichorhavirus orchidaceae; Histopathology; Histopatologia; Sintomatologia; Symptomatology; Vírus transmitidos por Brevipalpus; Viruses transmitted by Brevipalpus
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11135/tde-03022025-164706/

O vírus da mancha das orquídeas (orchid fleck virus-OFV), transmitido por ácaros da espécie Brevipalpus californicus é capaz de infectar naturalmente mais de 50 espécies de orquídeas e apresenta uma distribuição global o que aumenta sua importância. O OFV provoca lesões localizadas que estão associadas com a área de replicação viral e seus sintomas variam conforme o gênero da orquídea infectada apresentando desde manchas amarelas e cloróticas até anéis cloróticos ou necróticos. Dada a diversidade de sintomas o estudo da histopatologia em diferentes espécies de orquídeas infectadas pelo OFV torna-se crucial para contribuição de estudos sobre este patossistema. O presente trabalho buscou obter informações a respeito das modificações celulares ocasionadas pelo OFV em espécies de orquídeas pertencentes a cinco diferentes tribos. Para obtenção destes dados foram coletadas amostras de tecido sadio e lesionado que após serem fotografadas foram fixadas em solução Karnovsky, desidratadas em série etílica e infiltradas em resina hidroxi-etil-metacrilato (Leica Historesin). Uma parte das amostras foi armazenada em ultrafreezer a -80°C para extração de RNA. As amostras infiltradas em historesina foram seccionadas em micrótomo rotativo em espessura de 5-7 μm e coradas com Azul de Toluidina, para análise histológica usual e para os testes histoquímicos utilizou-se os reagentes Sudan Black e Cloreto de Zinco Iodado para análise de compostos lipídicos e presença de grãos de amido, respectivamente. Realizou-se também a técnica de criofratura para complementar a análise das alterações anatômicas das amostras. Todas as amostras coletadas foram submetidas a RT-PCR para a confirmação da presença do vírus, bem como tentativas de visualização da partícula viral a partir de análise dos tecidos sintomáticos em Microscópio Eletrônico de Transmissão (MET). As partículas virais obtidas como produto da RT-PCR foram purificadas e sequenciadas para confirmação do OFV nas amostras. Notou-se uma diferença de sintomas entre as espécies de orquídeas infectadas pelo OFV com predominância de anéis necróticos com halo clorótico seguido de lesões locais necróticas com halo clorótico e anéis necróticos. As alterações anatômicas observadas foram depressão do limbo foliar na região de lesão e células do parênquima apresentando hiperplasia, hipertrofia e plasmólise em regiões adjacentes à área lesionada. Além disso, notou-se acúmulo de compostos lipídicos na região de necrose e uma significativa diminuição dos grãos de amido nas células de amostras infectadas quando comparadas ao tecido sadio. Apesar da confirmação da presença do vírus nas amostras a partir da RT-PCR não foi possível visualizar partículas virais na análise no MET, apenas a presença de viroplasma no tecido de algumas espécies de orquídeas. Foi possível observar que, apesar da diferença entre os sintomas apresentados pelas espécies de orquídeas e sua anatomia do limbo foliar, o padrão anatômico e histoquímico das lesões foi o mesmo.