O papel de PIMREG na resposta celular frente ao acúmulo de dano ao DNA em células de glioblastoma tratadas com temozolomida

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Gasparini, Maria Vitória de Rizzo
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: γH2AX; DDR; DSBs; Glioblastoma; PIMREG
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-06112025-170823/

GBM é o tipo de câncer do SNC mais agressivo e com pior prognóstico, com sobrevida média de 12 a 15 meses após o diagnóstico. O tratamento padrão para GBM consiste em ressecção cirúrgica seguida por tratamento com RI e TMZ. A TMZ é um agente alquilante que causa a metilação de bases púricas, levando a DSBs e a morte das células. No entanto, a resistência ao tratamento com TMZ é alta em GBM e pode ser atribuída a diversos fatores. Entre eles, está o reparo de DNA, que pode ocorrer pelo reparo direto por MGMT, BER e, nos casos mais críticas, reparos de DSBs por vias como HR e NHEJ. PIMREG é uma proteína presente em diversos tipos de câncer, sendo a expressão mais elevada em GBM. A expressão de PIMREG é correlacionada com maior malignidade e pior prognóstico dos pacientes de GBM. Dados recentes do grupo mostraram que PIMREG está relacionada à sinalização de resposta a dano ao DNA (DDR) em células de GBM tratadas com agentes genotóxicos, já que a inibição de PIMREG causou a diminuição da ativação de ATM e RPA. Além disso, dados ainda não publicados mostraram que a ausência de PIMREG leva à diminuição do reparo por recombinação homóloga (HR). Buscando caracterizar o papel de PIMREG em DDR em células de GBM após o tratamento com temozolomida (TMZ), foram utilizadas células de GBM (linhagens T98G e U87MG) para ensaio de imunoprecipitação de PIMREG, seguida por análise de espectrometria de massas, para visualização do interatoma de PIMREG em linhagens de GBM. Além disso, a linhagem T98G selvagem e knockout para PIMREG foi utilizada em ensaios que buscavam visualizar como a deleção de PIMREG impacta na sinalização de dano, através da marcação de γH2AX por imunofluorescência e western blotting. Também foram realizados ensaios de acúmulo de SSBs e de viabilidade nas células WT e KO PIMREG frente ao tratamento com TMZ. Os ensaios de proteômica mostraram interatores de PIMREG relacionados a novas funções para essa proteína, como splicing e processamento de RNA, transcrição, metabolismo mitocondrial, tradução, biogênese de ribossomos e transporte de proteínas, e confirmaram sua função em DDR. Além disso, funções já conhecidas de PIMREG, como seu papel no desenvolvimento e no ciclo celular, também foram detectadas. Nos ensaios envolvendo a marcação de γH2AX pela técnica de western blotting, foi visto uma tendência ao aumento, mas sem significância estatística, do marcador de dano nas linhagens KO a nível basal, quando comparadas com a WT, enquanto nos ensaios de imunofluorescência, há uma diminuição significante da marcação de γH2AX nas KOs tanto a nível basal quanto após o tratamento. Em relação à viabilidade, foi visto que as células com ausência de PIMREG se mostraram mais resistente ao tratamento com TMZ em relação a selvagem. Em conjunto, esses dados sugerem que a ausência de PIMREG leva a uma resolução mais rápida do dano, ou menor sinalização de dano, o que pode estar associado a resistência. Nos ensaios de acúmulo de SSBs, não há diferença significante entre as linhagens WT e KO para PIMREG após o tratamento, reforçando que PIMREG deve atuar, conforme dados anteriores mostraram, no reparo de DSBs. Por fim, como dados adicionais, mostramos, de forma inédita, que PIMREG se localiza no citoplasma de células de GBM e se colocaliza em endossomos. Em conjunto, os dados apresentados trazem novas perspectivas acerca do papel de PIMREG em DDR e ao seu possível envolvimento na resistência de células tumorais frente ao tratamento com agentes genotóxicos.