Modulação das proteínas presentes no fluxo autofágico em macrófagos derivados de medula óssea de animais diabéticos durante o tratamento com insulina

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Pantoja, Kamilla da Costa
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Autofagia; Autophagy; Diabetes; Macrófagos; Macrophages
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9142/tde-31032025-153450/

A hiperglicemia promove a sinalização metabólica responsável pela liberação de insulina (pelas células β pancreáticas) no sangue, promovendo a captação de glicose pelas células que possuem transportadores de glicose em sua superfície. A presença de insulina na célula estimula várias vias de sinalização celular por meio de sua ligação aos receptores de insulina (IR), destacando a via mTOR, responsável pelo controle do metabolismo celular e pelo bloqueio da atividade autofágica. Neste novo estudo, investigamos a influência da insulina nos processos de autofagia e a participação das vias de sinalização em macrófagos derivados de medula óssea (BMDM) de camundongos diabéticos ou não diabéticos sob estímulo de lipopolissacarídeo (LPS). O tratamento com insulina ocorreu concomitantemente com a estimulação de LPS em 6 e 24 horas, em seguida, quantificamos as citocinas Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-α) e Interleucina 10 (IL- 10) no sobrenadante da cultura de células usando o método ELISA, assim como, avaliamos a produção de peróxido de hidrogênio. As vias de sinalização da autofagia BECLIN1, proteína 1 associada aos microtúbulos cadeia leve 3B (LC3B) e proteína 62 (p62) foram avaliadas por técnicas de Western blotting. Este projeto foi submetido ao Comitê de Ética no Uso de Animais registrado sob o número CEUA/FCF 627. Após a realização das análises, observamos que as proteínas relacionadas ao fluxo autofágico foram expressas exclusivamente durante o período de 24 horas. Os grupos estimulados com LPS e/ou tratados com insulina foram os principais expressores de proteínas autofágicas. No entanto, notamos a expressão de marcadores indicativos da não conclusão do processo nos grupos mencionados anteriormente, assim como no grupo controle. Além disso, observou-se que as citocinas são expressas somente após estímulo com LPS, e que o peróxido de hidrogênio é produzido em maiores quantidades em animais diabéticos. Isso evidencia que, mesmo em ausência de hiperglicemia, essas células permanecem estressadas, resultando na geração de espécies reativas de oxigênio. A análise dos resultados nos leva à conclusão de que, após uma semana de exposição a um ambiente hiperglicêmico, as células continuam a expressar altos níveis de citocinas inflamatórias nos grupos LPS. Além disso, observa-se uma elevada produção de peróxido de hidrogênio e uma incapacidade de concluir o processo de autofagia mesmo quando expostas a ambientes normoglicêmicos.