Estudo dos mecanismos de transporte celular das subunidades do complexo exossomo em Saccharomyces cerevisiae

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Okuda, Ellen Kazumi
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Exosome; Exossomo; Localização; Localization; Nuclear transport; Rrp44; Transporte Nuclear
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-29092021-163641/

O exossomo é um complexo multiproteico envolvido em processamento e degradação de vários tipos de RNA em eucariotos. Este complexo está presente tanto no núcleo quanto no citoplasma da levedura. O complexo exossomo possui duas subunidades catalíticas: Rrp6, a qual é exclusivamente nuclear; e Rrp44, que possui domínios endonucleolítico e exonucleolítico, sendo essencial para a sobrevivência da célula. O objetivo do presente trabalho foi analisar a localização do complexo exossomo e as vias de transporte de suas subunidades para o núcleo celular, com foco na subunidade Rrp44. Para tal, a principal técnica empregada neste trabalho foi a microscopia de fluorescência, através da qual foram feitas análises utilizando-se diversas cepas mutantes e fusões proteicas com GFP e com mCherry. Os resultados apresentados mostram uma localização subnucleolar do complexo exossomo quando suas subunidades são expressas em níveis endógenos, sob controle dos seus próprios promotores, em fusão com GFP. As subunidades Rrp6 e Rrp44 localizam-se no núcleo mesmo quando superexpressas. Já outras subunidades do complexo, como Rrp41 e Rrp43, apresentam forte sinal citoplasmático na mesma condição de expressão. Ademais, pudemos identificar os possíveis sinais de localização nuclear da subunidade Rrp44, reconhecidos pelas carioferinas essenciais Srp1 e Kap95,responsáveis pelo transporte nuclear de Rrp44. Os resultados obtidos neste trabalho mostram que o exossomo de levedura está principalmente localizado no núcleo e concentrado no nucléolo, o que tem grande importância no estudo funcional deste complexo.